磁珠法石蜡包埋样品DNA提取试剂盒
分类：石蜡包埋样本DNA提取目录：DE02
产品特性：
| 保护操作人员健康，环境安全 |
| 高通量：快速完成石蜡包埋样本DNA提取 |
| 增强肿瘤和其他疾病诊断和靶向治疗准确性 |
| 高效去交联效果 |
| 自动化适用 |
本试剂盒用于石蜡包埋组织中基因组DNA的提取。试剂盒不使用二甲苯作为石蜡溶剂，从而增加操作人员和环境的安全性；经过独特的表面修饰的磁珠，结合核酸能力更强，洗脱更容易；操作步骤简单，适合于基因组DNA的磁珠自动化提取过程。本试剂盒纯化的DNA可直接用于各种下游操作，包括PCR、文库构建、测序分析等。
操作流程（示意图）：
磁珠法石蜡包埋样本DNA提取试剂盒在肿瘤病人FFPE样本提取核酸的应用实例、与国际金标准试剂盒比较和通过石蜡包埋样本所提取的gDNA的real-time PCR实验验证提取效果的实例见下。
医脉赛（EmerTher）磁珠法石蜡包埋样本DNA提取试剂盒在肿瘤病人FFPE样本提取核酸的应用实例。
1.样本
四名肿瘤病人FFPE样本（3片10μm厚的石蜡切片组织样本/每人）
2.试剂
Emerther磁珠法石蜡包埋样本DNA提取试剂盒
3.核酸提取方法
EmerTher磁珠法石蜡包埋样本DNA提取试剂盒，用自动核酸提取仪提取
A、 脱蜡
1. 溶解蛋白酶K：按标签所示，吸取PK溶解液至蛋白酶K干粉中配制成蛋白酶K溶液20mg/ml，颠倒混匀数次让蛋白酶K充分溶解；
2. 取一定量石蜡包埋组织（如1-5片10µm厚的石蜡切片组织样本），转移至1.5ml离心管中；
3. 加入300µl石蜡样本液，150µl ATL和20µl蛋白酶K溶液，置于56°C 恒温水浴锅孵育1hr ，期间混匀3-5次。也可消化过夜；
B、消化
4. 在组织样本中加入150µl石蜡消化液，置于85°C恒温水浴锅孵育30min；
C、 DNA提取
5. 15000g离心5min；
6. 小心吸取全部下层液体，加入375µl裂解吸附液、30µl核酸提取磁珠，置于旋转混合仪，温和混匀20min；
7. 用磁分离架吸附磁珠1min，弃上清；
8. 加入700µl洗涤液I洗涤磁珠，颠倒混匀洗涤1min，吸附磁珠，弃上清；
9. 再次加入700µl洗涤液I洗涤磁珠1min，吸附磁珠，弃上清；
10. 加入700µl洗涤液II洗涤磁珠1min，吸附磁珠，弃上清；
11. 再次加入700µl洗涤液II洗涤磁珠1min，吸附磁珠；
12. 尽量吸弃上清后静置5min，去除乙醇残留；
13. 加入100µl洗脱液，50°C混合均匀洗脱5min；
14. 磁场吸附磁珠，回收含基因组DNA的洗脱液至另一干净离心管内；
15. 用于后续检测或-20℃储存。
4.结果：提取的DNA产量高、纯度高，方便进行下一步的PCR扩增。
磁珠法石蜡包埋样本DNA提取试剂盒与目前市场上国际金标准试剂盒的比较。
磁珠法石蜡包埋样本DNA提取试剂盒所提取gDNA的real-time PCR实验，用以验证医脉赛（Emerther）磁珠法石蜡包埋样本DNA提取效果。（石蜡包埋样本编号：1603089）
实验结论
包埋样本DNA提取试剂盒从5片石蜡样本切片中大约可以提取4微克genomic DNA。用所得gDNA做GAPDH的real-time PCR获得曲线较好，
且提取所得DNA的OD值（260/280）分别为1.81，1.90，说明所得DNA质量良好。由于该DAN提取试剂盒所提取的DNA量较多，且质量良好，证明试剂盒效果良好。
| 目录号 | 规格 | 适用机型 |
|---|---|---|
| DE02001 | 20份 | 瓶装，适用于手工提取及Tecan、Hamilton等全自动移液工作站 |
| DE02002 | 100份 | 瓶装，适用于手工提取及Tecan、Hamilton等全自动移液工作站 |
| DE0296B | 96份 | 医脉赛、圆点、奥盛、天隆、天根等品牌多种纯化机型 |
| DE0260C | 60份 | Thermo Scientific KingFisher mL磁珠提取仪 |
| DE0296D | 96份 | Thermo Scientific KingFisher Flex纯化系统 |
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【手动提取步骤】
A、 脱蜡
1. 溶解蛋白酶K：按标签所示，吸取PK溶解液至蛋白酶K干粉中配制成蛋白酶K溶液20mg/ml，颠倒混匀数次让蛋白酶K充分溶解；
2. 取一定量石蜡包埋组织（如1-5片10µm厚的石蜡切片组织样本），转移至1.5ml离心管中；
3. 加入300µl石蜡样本液，150µlATL和20µl蛋白酶K，置于56°C 恒温水浴锅孵育1hr，期间混匀3-5次。也可消化过夜；
B、消化
4. 在组织样本中加入150µl石蜡消化液，置于85oC恒温水浴锅孵育30min；
C、DNA提取
5. 15000g离心5min；
6. 小心吸取全部下层液体，加入375µl裂解吸附液、30µl核酸提取磁珠，置于旋转混合仪，温和混匀20min；
7. 用磁分离架吸附磁珠1min，弃上清；
8. 加入700µl洗涤液I洗涤磁珠，颠倒混匀洗涤1min，吸附磁珠，弃上清；
9. 再次加入700µl洗涤液I洗涤磁珠1min，吸附磁珠，弃上清；
10. 加入700µl洗涤液II洗涤磁珠1min，吸附磁珠，弃上清；
11. 再次加入700µl洗涤液II洗涤磁珠1min，吸附磁珠；
12. 尽量吸弃上清后静置5min，去除乙醇残留；
13. 加入100µl洗脱液，50°C混合均匀洗脱5min；
14. 磁场吸附磁珠，回收含基因组DNA的洗脱液至另一干净离心管内；
15. 用于后续检测或-20℃储存。
【自动化提取步骤（以32通道为例）】
1.DE0296B预装板设置（96空深孔板，样品量：15000g离心后取全部下层液体，16通量）
2.从试剂盒中取出预分装96深孔板，轻甩96深孔板使试剂及磁珠均集中到96深孔板底部。使用前小心撕去铝箔封口膜，避免96深孔板振动，防止液体溅出（注意：室温低于
15℃时，请在开封使用前将96孔板置于37℃预热20min，以避免沉淀析出）；
3.在第1列、第7列中加入脱蜡消化后的全部样本（下层液体）；
4.放置2个8道磁套；根据附表所列的自动化提取程序，开始提取；客户可按所使用的核酸自动提取仪适当调整程序，如果有问题，请联系技术支持；
5.转移第6列、第12列中含核酸的洗脱液，用于后续检测或-20℃储存。
| 步骤 | 空位 | 名称 | 混合时间 （sec.） | 磁吸时间 （sec.） | 等待时间 （sec.） | 容积 （μl） | 混合速度 | 温度（℃） |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 1 | 1 | 裂解 | 600 | 0 | 0 | 700 | 快 | 37 |
| 2 | 2 | 吸磁 | 30 | 30 | 0 | 750 | 中 | 室温 |
| 3 | 1 | 结合 | 300 | 30 | 0 | 700 | 快 | 37 |
| 4 | 2 | 洗涤1 | 120 | 20 | 0 | 700 | 快 | 室温 |
| 5 | 3 | 洗涤2 | 120 | 20 | 0 | 700 | 快 | 室温 |
| 6 | 4 | 洗涤3 | 120 | 20 | 0 | 700 | 快 | 室温 |
| 7 | 5 | 洗涤4 | 120 | 30 | 120 | 700 | 快 | 室温 |
| 8 | 6 | 洗脱 | 300 | 60 | 0 | 100 | 中 | 50 |
| 9 | 4 | 移去磁珠 | 30 | 0 | 0 | 700 | 快 | 室温 |
1、试剂中是否还有有毒试剂？
我们的试剂不含有二甲苯等有毒试剂，可以在保护实验室操作人的安全下快速方便的进行提取。
2、过夜消化与消化3h的差异？
过夜消化的提取效果更好，但是要是时间紧迫，3h消化液足以满足实验要求。
