磁珠法石蜡包埋样品RNA提取试剂盒
分类：石蜡包埋样本RNA提取目录：RE02
产品特性：
| 环境安全 |
| 高通量：自动快速完成石蜡样本RNA提取 |
| 高效去交联效果 |
| 稳定：保护易降解RNA |
| 自动化适用 |
| 增强肿瘤和其他疾病诊断和靶向治疗准确性 |
本试剂盒适用于石蜡样本中RNA。试剂盒由高效吸附核酸的超顺磁性纳米微球和安全环保的提取试剂体系组成：经过独特的表面修饰的磁珠，结合核酸能力更强、洗脱更容易；操作步骤简单，操作时间短，可在室温下完成整个提取过程，适合于快速核酸提取的磁珠自动化过程。
操作流程（示意图）：
磁珠法石蜡包埋样本RNA提取试剂盒提取石蜡包埋样本RNA的应用实例见下。
| 目录号 | 规格 | 适用机型 |
|---|---|---|
| RE02001 | 20份 | 瓶装，适用于手工提取及Tecan、Hamilton等全自动移液工作站 |
| RE02002 | 100份 | 瓶装，适用于手工提取及Tecan、Hamilton等全自动移液工作站 |
| RE0296B | 96份 | 医脉赛、圆点、奥盛、天隆、天根等品牌多种纯化机型 |
| RE0260C | 60份 | Thermo Scientific KingFisher mL磁珠提取仪 |
| RE0296D | 96份 | Thermo Scientific KingFisher Flex纯化系统 |
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【手工提取步骤】
A、 脱蜡
1. 溶解蛋白酶K： 按标签所示， 吸取PK溶解液至蛋白酶K干粉中配制成蛋白酶K溶液20mg/ml，颠倒混匀数次让蛋白酶K充分溶解；
2. 取一定量石蜡包埋组织（如1-5片10µm厚的石蜡切片组织样本），转移至1.5ml离心管中；
3. 加入300µl石蜡样本液，150µl ATL缓冲液和10µl 蛋白酶K ，置于56°C 恒温水浴锅孵育1hr，期间混匀3-5次。也可消化过夜；
B、消化
4. 在组织样本中加入150µl石蜡消化液置于85°C 恒温水浴锅孵育20min；
C、 RNA提取
5. 15,000g离心5min；
6. 小心吸取全部下层液体，加入600µl裂解吸附液、30µl核酸提取磁珠，置于旋转混合仪，温和混匀15min；
7. 用磁分离架吸附磁珠1min，弃上清；
8. 加入600µl洗涤液I 洗涤磁珠，颠倒混匀洗涤1min，吸附磁珠，弃上清；
9. 再加入600µl洗涤液II洗涤磁珠1min，吸附磁珠，弃上清；
10. 加入600µl洗涤液III 洗涤磁珠1min，吸附磁珠，弃上清；
11. 再加入600µl洗涤液III洗涤磁珠1min，吸附磁珠；
12. 尽量吸弃上清后静置3-5min，去除乙醇残留；
13. 加入100µl洗脱液，混和均匀洗脱5min；
14. 磁场吸附磁珠，回收含RNA的洗脱液至另一RNase-free离心管内；进行RNA检测及后续实验，或者保存于-20°C冰箱；长期保存请置于-70°C或加入RNase Inhibitor。
【自动化提取步骤（以32通道为例）】
1. RE0296B预装板设置（96孔深孔板，样品量200µl，16通量）
2. 从试剂盒中取出预分装96深孔板，轻甩96深孔板使试剂及磁珠均集中到96深孔板底部。使用前小心撕去铝箔封口膜，避免96深孔板振动，防止液体溅出（注意：室温低
于15°C时，请在开封使用前将96孔板置于37°C预热20min，以避免沉淀析出）；
3. 在第1列、第7列溶液中加入约300µl脱蜡消化后的液体样本；
4. 放置2个8道磁套；选择附表所列的自动化提取程序，开始提取；客户可按所使用的核酸自动提取仪适当调整程序，如果有问题，请联系技术支持；
5. 转移第6列、第12列中含核酸的洗脱液至RNase-free离心管内，用于后续检测或-20°C储存。
| 次序 | 列号 | 程序 | 混合时间（sec.） | 磁吸时间（sec.） | 等待时间（sec.） | 体积（μl） | 混合速度 | 温度（℃） |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 1 | 1 | 裂解 | 600 | 0 | 0 | 800 | 快 | 37 |
| 2 | 2 | 吸磁 | 30 | 20 | 0 | 600 | 快 | 室温 |
| 3 | 1 | 结合 | 300 | 20 | 0 | 800 | 快 | 37 |
| 4 | 2 | 洗涤1 | 120 | 20 | 0 | 600 | 快 | 室温 |
| 5 | 3 | 洗涤2 | 60 | 20 | 0 | 600 | 快 | 室温 |
| 6 | 4 | 洗涤3 | 60 | 30 | 0 | 600 | 快 | 室温 |
| 7 | 5 | 洗涤4 | 60 | 30 | 120 | 600 | 快 | 室温 |
| 8 | 6 | 洗脱 | 300 | 60 | 0 | 100 | 快 | 45 |
| 9 | 4 | 移去磁珠 | 30 | 0 | 0 | 600 | 快 | 室温 |
A. RNA得率低，如何解决？
1.取样前样品没有充分消化。样品取样前应按照说明条件充分消化。
2.磁珠加样量不足。请在吸取磁珠前将核酸提取磁珠悬液充分混匀。
3.与磁珠结合不充分。在RNA与磁珠结合过程中请温和摇匀，确保RNA与磁珠充分结合。
4.样品没有按照要求保存导致RNA降解。
B. 获得的RNA条带弥散，RNA片段断裂，如何解决？
1. 样品冷藏时间过久，没有按照要求冷冻保存。请使用新鲜及正确保藏的样品。
2. 操作过程过于剧烈，RNA被机械打断。请严格按照说明书操作。
C. RNA样品不纯，抑制或者干扰后续试验，如何解决？
1.样本裂解结合后没有进行磁珠转移更换离心管，导致管壁黏附的杂质污染最终提取物。
2.磁珠没有完全干燥，有乙醇残留。最后一次洗涤后尽量吸净离心管内的液体。
3.加入洗脱液之前将磁珠静置5min左右，确保乙醇完全挥发。
