磁珠法组织RNA提取试剂盒在提取虾肉组织RNA的应用实例见下。

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【手工提取步骤】
1. 预处理过程：将新鲜组织用一次性刀片切成小块，称取10-40mg组织碎片于离心管中，加入300µl组织研磨液，加入钢珠或玻璃珠，使用组织研磨器充分研磨（缺乏研磨

过程可能导致RNA得率降低）； 离心10000g 5min，取200µl上清液至另一干净离心管中；

2. 加入30µl磁珠、600µl裂解吸附液；置于旋转混和仪，温和混匀10min，用磁分离架吸附磁珠，弃上清；

3. 加入600µl洗涤液I洗涤磁珠2min，吸附磁珠，弃上清；

4. 加入600µl洗涤液II洗涤磁珠2min，并转移至另一干净离心管中；

5. 吸附磁珠，弃上清；

6. 加入600µl洗涤液III洗涤磁珠1min，吸附磁珠，弃上清；

7. 再次加入600µl洗涤液III洗涤磁珠1min；吸附磁珠，弃上清，尽量吸除所有残留液体；

8. 静置3-5min，去除乙醇残留；

9. 加入100µl洗脱液，混合均匀，洗脱5min；

10. 磁场吸附磁珠，回收含核酸洗脱液至另一RNase-free离心管内，用于后续检测或保存于-20oC冰箱。

【自动化提取步骤（以32通道为例） 】

1. RE0396B预装板设置（96孔深孔板，样品量200µl，16通量）

2. 从试剂盒中取出预分装96深孔板，轻甩96深孔板使试剂及磁珠均集中到96深孔板底部。使用前小心撕去铝箔封口膜，避免96深孔板振动，防止液体溅出（注意：室温低

于15°C时，请在开封使用前将96孔板置于37°C预热20min，以避免沉淀析出）；

3. 在第1列、第7列溶液中加入200µl组织研磨后的上清液；

4. 放置2个8道磁套；选择附表所列的自动化提取程序，开始提取；客户可按所使用的核酸自动提取仪适当调整程序，如果有问题，请联系技术支持；

5. 转移第6列、第12列中含核酸的洗脱液至RNase-free离心管内，用于后续检测或-20°C储存。

A. 组织RNA得率低

1.缺乏研磨过程可能导致RNA得率降低。

2.磁珠加样量不足。请在吸取磁珠前将核酸提取磁珠悬液充分混匀。

3.与磁珠结合不充分。在RNA与磁珠结合过程中请温和摇匀，确保RNA与磁珠充分结合。

4.样品没有按照要求保存导致RNA降解。

B. 获得的RNA条带弥散，RNA片段断裂

1.样品冷藏时间过久，没有按照要求冷冻保存。请使用新鲜及正确保藏的样品。

2.操作过程过于剧烈，RNA被机械打断。请严格按照说明书操作。

C. RNA样品不纯，抑制或者干扰后续试验

1.样本裂解结合后没有进行磁珠转移更换离心管，导致管壁黏附的杂质污染最终提取物。

2.磁珠没有完全干燥，有乙醇残留。最后一次洗涤后尽量吸净离心管内的液体。

3.加入洗脱液之前将磁珠静置5min左右，确保乙醇完全挥发。