医脉赛（EmerTher）磁珠法细胞RNA提取试剂盒在提取细胞RNA的应用实例见下。

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【手工提取步骤】
1. 裂解细胞（根据细胞来源不同，选择相应的实验步骤）：
a. 单层培养细胞：吸去直径3.5cm培养皿贴壁细胞（约106个细胞）培养基，加入1ml细胞消化液裂解细胞2min（加量可根据培养板面积决定，使细胞消化液可以覆盖培养板），用移液器吸打，并转移细胞悬液至2ml离心管中；
b. 细胞悬液：加入等体积细胞消化液裂解细胞（每105 -107个细胞加1ml 细胞消化液），用移液器吸打，并转移细胞悬液至1.5ml离心管中；
c. 血液处理：直接取新鲜的血液，加入1倍体积市售红细胞裂解液（不包含在本试剂盒），混匀后室温放置1min，1000rpm 离心5min。弃上清，收集白细胞沉淀。每1-5ml血液收集的白细胞沉淀中加入200-1000µl细胞消化液，用移液器吸打，并转移细胞悬液至1.5ml离心管中；
2. 取100µl上述细胞消化液样本于另一离心管，加入100µl 灭菌水，600µl核酸结合液，置于旋转混和仪，温和混匀5min；
3. 加入30µl磁珠悬浮液，置于旋转混和仪，温和混匀5min，用磁分离架吸附磁珠，弃上清；
4. 加入600µl洗涤液I洗涤磁珠5min，吸附磁珠，弃上清；
5. 加入600µl洗涤液II洗涤磁珠2min，吸附磁珠，弃上清；
6. 加入600µl洗涤液III洗涤磁珠2min，吸附磁珠，弃上清；
7. 再次加入600µl洗涤液III洗涤磁珠2min；
8. 吸附磁珠，弃上清，并吸除残留液体；
9. 静置3-5min，去除乙醇残留；
10. 加入100µl洗脱液，温和混合洗脱5min；
11. 磁场吸附磁珠，回收含核酸洗脱液至另一RNase-free离心管内，用于后续检测或保存于-20°C冰箱；长期保存请置于-70°C或加入RNase Inhibitor。

【自动化提取步骤（以32通道为例）】
1. RE0596B预装板设置（96孔深孔板，样品量200µl，16通量）

2. 从试剂盒中取出预分装96深孔板，轻甩96深孔板使试剂及磁珠均集中到96深孔板底部。使用前小心撕去铝箔封口膜，避免96深孔板振动，防止液体溅出（注意：室温低于15°C时，请在开封使用前将96孔板置于37°C预热20min，以避免沉淀析出）；
3. 取200µl细胞消化后的样本液，加入在第1列、第7列溶液中；
4. 放置2个8道磁套；选择附表所列的自动化提取程序，开始提取；客户可按所使用的核酸自动提取仪适当调整程序，如果有问题，请联系技术支持；
5. 转移第6列、第12列中含核酸的洗脱液至RNase-free离心管内，用于后续检测或-20°C储存。

A. 细胞RNA得率低
1、取样前样品没有充分混匀。细胞样品取样前适当将样品摇匀。
2、磁珠加样量不足。请在吸取磁珠前将核酸提取磁珠悬液充分混匀。
3、与磁珠结合不充分。在RNA与磁珠结合过程中请温和摇匀，确保RNA与磁珠充分结合。
4、样品没有按照要求保存导致RNA降解。

B. 获得的RNA条带弥散，RNA片段断裂
1、样品冷藏时间过久，没有按照要求冷冻保存。请使用新鲜及正确保藏的样品。
2、操作过程过于剧烈，RNA被机械打断。请严格按照说明书操作。

C. RNA样品不纯，抑制或者干扰后续试验
1、样本裂解结合后没有进行磁珠转移更换离心管，导致管壁黏附的杂质污染最终提取物。
2、磁珠没有完全干燥，有乙醇残留。最后一次洗涤后尽量吸净离心管内的液体。
3、加入洗脱液之前将磁珠静置5min左右，确保乙醇完全挥发。