谷胱甘肽（GST-tag）亲和磁珠
分类：谷胱甘肽 (GST-tag) 亲和目录：AE05
产品特性：
| 粒径：500nm |
| 磁响应性:>30emu/g |
| pH4-10 |
| 最大程度保持蛋白活性 |
| 高纯度低背景：非特异性吸附低 |
| 设备简单 |
谷胱甘肽亲和纯化磁珠是由超顺磁性纳米颗粒与谷胱甘肽（glutathione）共价偶联而成。EmerTher谷胱甘肽亲和纯化磁珠具有快速磁响应性，高蛋白结
合能力和低非特异性结合，可快速有效地从细胞裂解液中分离纯化GST(glutathione-S-transferase)-tag融合蛋白。整个过程简单快捷，可使用磁分离器操作，或与仪器联
用达到自动化蛋白纯化，适用于高通量应用。
操作流程（示意图）：
谷胱甘肽（GST-tag）亲和磁珠从诱导后的大肠杆菌裂解母液中纯化GST蛋白的应用实例见下：
| 目录号 | 规格 | 适用机型 |
|---|---|---|
| AE05001 | 50mg/ml，1ml | 略 |
| AE05002 | 50mg/ml，5ml | 略 |
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【手工实验步骤】
本实验步骤提供一般操作流程，针对每个特定融合蛋白，请根据GST-tag融合蛋白纯化原理、目标蛋白表达量及其性质进行优化及预处理。
A. 纯化步骤
1. 裂解细胞，得到的含GST-tag融合蛋白的细胞裂解液；
2. 吸取1ml含GST-tag融合蛋白的细胞裂解液于1.5ml灭菌离心管中；
3. 加入20µl磁珠，轻柔振荡悬浮，在4℃下孵育30min；
4. 磁场吸附，弃去上清液；
5. 加入1ml结合/洗涤缓冲液洗涤3次，每次5min，磁场吸附，弃去上清液；
6. 加入100µl含谷胱甘肽的洗脱缓冲液，洗脱15分钟；磁场吸附，将洗脱液移至灭菌离心管；需要的话可重复洗脱一次，最后合并洗脱液；
7. 进行蛋白浓度测定及SDS-PAGE检测洗脱产物。
B. 磁珠再生
1. 洗脱目标蛋白后，加入500µl磁珠再生用洗涤液I (6M Urea)洗涤磁珠10min，磁场吸附，弃去上清液；
2. 加入500µl磁珠再生用洗涤液II (含0.1%SDS的0.5M NaCl溶液) 洗涤磁珠2次，每次5min，磁场吸附，弃去上清液；
3. 磁珠用结合/洗涤缓冲液洗涤3次后，重悬于磁珠保存液，于2-8℃保存。
A. GST-tag融合蛋白的回收率低, 怎么解决？
1. 蛋白可能会降解。可在细胞裂解液中添加蛋白酶抑制剂。
2. 磁珠用量不足。增加磁珠的用量。
3. 样品中GST-tag融合蛋白含量低。增加样品的浓度或体积。
B. 使用含谷胱甘肽的洗脱缓冲液，GST-tag融合蛋白没有完全洗脱下来, 怎么解决？
1. 分子量大的蛋白质一般来说洗脱效率较低，可提高谷胱甘肽在洗脱缓冲液中的浓度至100mM。
2. 洗脱条件过于温和。可在洗脱缓冲液提高NaCl的浓度(最终浓度可达500mM)，以增加洗脱缓冲液的离子强度；在洗脱缓冲液中添加0.1-1％的Triton X-100或Tween-20
的洗涤剂；增加洗脱所用的孵育时间；或增加洗脱缓冲液的体积。
3. 洗脱GST-tag融合蛋白在pH≥8.0时更有效。增加洗脱缓冲液的pH值可能会增加回收率。
C. 在洗脱样品中发现非特异性蛋白质, 怎么解决？
1. 蛋白可能会降解。可在细胞裂解液中添加蛋白酶抑制剂。
2. 非特异性蛋白质结合到磁珠上。 可在结合/洗涤缓冲液中添加NaCl (最终浓度可达500mM) 或洗涤剂（如0.01-0.1％的Tween-20），以减少非特异性结合。
