磁珠法全血总核酸(NA)提取试剂盒
分类：全血总核酸(NA)提取目录：RD02
产品特性：
| 高通量：快速完成全血总核酸提取 |
| 环境安全：不含苯酚、氯仿等有机试剂 |
| 抗凝剂普适：可用于各种抗凝剂 |
| 自动化适用：为自动化过程精心设计 |
本试剂盒用于全血样本总核酸提取。试剂盒由高效吸附核酸的超顺磁性纳米微球和安全环保的提取试剂体系组成：经过独特的表面修饰的磁珠，结合核酸能力更强；洗脱容易，使用TE缓冲液或水即可将血液总核酸从磁珠上洗脱下来；操作简单、快速，适用于血液总核酸的磁珠自动化提取过程。使用本试剂盒纯化的血液总核酸可适用于各种下游操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交、基因测序等实验。
操作流程（示意图）：
磁珠法全血总核酸（NA）提取试剂盒在提取血液总核酸的应用实例见下。
| 目录号 | 规格 | 适用机型 |
|---|---|---|
| RD02001 | 20份 | 瓶装，适用于手工操作及Tecan、Hamilton等全自动移液工作站 |
| RD02002 | 100份 | 瓶装，适用于手工操作及Tecan、Hamilton等全自动移液工作站 |
| RD0296A | 96份 | Thermo Scientific KingFisher自动纯化系统 |
| RD0296B | 96份 | 医脉赛、圆点、奥盛、天隆、天根等品牌多种纯化机型 |
| RD0260C | 60份 | Thermo Scientific KingFisher mL磁珠提取仪 |
| RD0296D | 96份 | Thermo Scientific KingFisher Flex纯化系统 |
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【手动提取实验步骤】
1. 溶解蛋白酶K：按标签所示，吸取PK溶解液至蛋白酶K干粉中配制成蛋白酶K溶液40mg/ml，颠倒混匀数次让蛋白酶K充分溶解；
2. 取200-300µl全血样本放入2ml离心管中，加入20μl蛋白酶K溶液、700µl裂解吸附液、30µl磁珠；
3. 置于旋转混和仪，充分混匀30min；
4. 用磁分离架吸附磁珠1min，弃上清液；
5. 加入800µl洗涤液I洗涤磁珠，将含磁珠的洗涤液转移至另一干净离心管中，颠倒混匀洗涤10min，吸附磁珠，弃上清液；
6. 加入800µl洗涤液II洗涤磁珠3min，吸附磁珠，弃上清液；
7. 加入800µl洗涤液III洗涤磁珠3min，吸附磁珠，弃上清液；
8. 再次加入800µl洗涤液III洗涤磁珠3min，吸附磁珠，弃上清液后静置3-5min，去除乙醇残留；
9. 加入100µl洗脱液，60℃混合洗脱10min；
10. 磁场吸附磁珠，回收含基血液总核酸的洗脱液至另一RNase-free离心管，用于后续检测或-20℃储存。
其它样本的预处理
A. 血细胞样本总核酸的提取
对分离血浆成分后的血细胞样本进行核酸提取时，请预先用蒸馏水1:1稀释样本：取100µl血细胞样本放入离心管中，加入100µl ddH2O，混合均匀。其余实验步骤同2-10。
B. 大样本血液总核酸的提取
取500µl-1000µl新鲜全血样本放入2ml离心管中，加入1ml红细胞裂解液（医脉赛目录号：CE01001或客户自备），颠倒数次裂解红细胞；置于离心机，于转速350g离心
10min；弃上清，加入200µl ddH2O，混合均匀。其余实验步骤同2-10。
【自动化提取步骤（以32通道为例）】
1. RD0296B预装板设置（96孔深孔板，样品量200µl，16通量）
2. 从试剂盒中取出预封装96深孔板，轻甩96深孔板使试剂及磁珠均集中到96深孔板底部。使用前小心撕去铝箔封口膜，避免96深孔板振动，防止液体溅出（注意：室温低
于15℃ 时，请在使用前将96孔板置于37℃ 预热20min，以避免沉淀析出）；
3. 在第1列、第7列中加入200µl样本和20μl蛋白酶K溶液；
4. 放置2个8道磁套；选择附表所列的自动化提取程序，开始提取；客户可按所使用的核酸自动提取仪适当调整程序，如果有问题，请联系技术支持；
5. 转移第6列、第12列中含核酸的洗脱液，用于后续检测或-20℃ 储存。
| 次序 | 列号 | 程序 | 混合时间（sec.） | 磁吸时间（sec.） | 等待时间（sec.） | 体积（μl） | 混合速度 | 温度（℃） |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 1 | 1 | 裂解 | 900 | 0 | 0 | 900 | 快 | 50 |
| 2 | 2 | 吸磁 | 30 | 20 | 0 | 800 | 中 | 室温 |
| 3 | 1 | 结合 | 600 | 30 | 0 | 900 | 快 | 50 |
| 4 | 2 | 洗涤1 | 600 | 20 | 0 | 800 | 快 | 室温 |
| 5 | 3 | 洗涤2 | 240 | 20 | 0 | 800 | 快 | 室温 |
| 6 | 4 | 洗涤3 | 180 | 20 | 0 | 800 | 快 | 室温 |
| 7 | 5 | 洗涤4 | 180 | 30 | 60 | 800 | 快 | 室温 |
| 8 | 6 | 洗脱 | 420 | 60 | 0 | 200 | 快 | 70 |
| 9 | 4 | 移动磁场 | 30 | 0 | 0 | 800 | 快 | 室温 |
1.全血样本总核酸得率低的原因是什么，如何解决？
1）取样前样品没有充分混匀。血液样品取样前适当将样品摇匀，使白细胞均匀悬浮于血样中。
2）磁珠加样量不足。请在吸取磁珠前将核酸提取磁珠悬液充分混匀。
3）与磁珠结合不充分。在核酸与磁珠结合过程中请温和摇匀，确保与磁珠充分结合。
4）样品没有按照要求保存导致核酸降解。
2.全血样本中无RNA条带的原因是什么，如何解决？
RNA易降解，请使用1）新鲜样本；2）-80℃ 短期保存样本；
3）加入RNA保存液， -20℃ 保存样本；4）其他正确抑制RNase的血液保存方法。
