磁珠法血浆游离DNA提取试剂盒在人血浆样本提取cfDNA的应用实例见下。

1）用医脉赛磁珠法cfDNA提取试剂盒对23个不同人血浆样本（5个肿瘤患者，18个体检者）使用自动化核酸提取仪提取cfDNA，50μL洗脱液洗脱。

cfDNA浓度使用AccuBlue High Sensitivity dsDNA Auantitation Kit检测，23个样本检测结果如下

2）使用磁珠法cfDNA提取试剂盒提取cfDNA后的Agilent 2100测试结果：

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【手工提取步骤（样本的提取体积可变，一次可处理200μl-4ml血浆样本，以下以400μl和2ml为例说明）】

[A] 400µl样本量实验步骤:

1. 将蛋白酶K和PK溶解液混合，配制成蛋白酶K溶液（20mg/ml）；

2. 取400µl血浆样品至2ml 离心管中注1，加入40µl蛋白消化液、10µl蛋白酶K溶液, 混匀后56oC孵育15min；

3. 取出离心管，加入500µl核酸结合液、10µl核酸提取磁珠，置于旋转混合仪，温和混匀30min；

4. 用磁分离架吸附磁珠1min，弃上清；

5. 加入500µl洗涤液 I 洗涤磁珠，颠倒混匀洗涤2min，吸附磁珠，弃上清；

6. 加入500µl洗涤液 II，将溶液转移至干净的离心管中；

7. 洗涤磁珠2min，吸附磁珠，弃上清；

8. 尽量吸除残留液体后，静置2min注2，去除乙醇残留；

9. 加入30µl洗脱液 （TE缓冲液或双蒸水适用），混合均匀，置于56℃水浴洗脱5min；

10. 磁场吸附磁珠，回收含cfDNA的洗脱液至另一干净离心管内；

11. 进行DNA检测及后续实验。

[B] 2ml样本量实验步骤

1. 将蛋白酶K和PK溶解液混合，配制成蛋白酶K溶液（20mg/ml）；

2. 取2ml血浆样品至10ml 离心管中注1，加入200µl蛋白消化液、50µl蛋白酶K溶液，混匀后56oC孵育15min；

3. 取出离心管，加入2500µl核酸结合液、50µl核酸提取磁珠，置于旋转混合仪，温和混匀30min；

4. 用磁分离架吸附磁珠1min，弃上清；

5. 加入1000µl洗涤液 I 洗涤磁珠，转移至2ml新离心管注1，颠倒混匀洗涤2min，吸附磁珠，弃上清；

6. 加入1000µl洗涤液 II, 将液体转移至干净的离心管；

7. 洗涤磁珠2min，吸附磁珠，弃上清；

8. 尽量吸除残留液体后，静置2min注2，去除乙醇残留；

9. 加入50µl洗脱液 （TE缓冲液或ddH2O适用），混合均匀，置于56oC水浴洗脱5min；

10. 磁场吸附磁珠，回收含cfDNA的洗脱液至另一干净离心管内；

11. 进行DNA检测及后续实验。

1.手动提取过程中有什么需要注意的呢？

• 洗涤液II洗涤后，尽量将残留液体去除后，让样品静置2-5min左右以挥发乙醇，然后加入洗脱液。如乙醇残留太多会对后续检测有一定影响；但样品如果过于干燥，可能

导致DNA不容易从磁珠上洗脱下来，减少提取量。

• 洗脱液量和洗脱次数：减少洗脱液量可提高提取浓度，但可能降低总提取量；同等体积的洗脱液少量多次洗脱可提高总提取量。

• 洗脱时轻微振荡离心管有助于核酸溶解。