磁珠法病毒RNA提取试剂盒
分类：病毒RNA提取目录：RE01
产品特性：
| 高通量：自动快速完成病毒RNA核酸提取 |
| 环境安全：不含苯酚、氯仿等有机试剂 |
| 生物安全：第一步操作即裂解细胞、变性蛋白 |
| 稳定：保护易降解RNA |
| 方便：无需高温洗脱，减少挥发和交叉污染 |
| 自动化适用 |
本试剂盒适用于提取咽拭子等液体样本中病毒RNA。试剂盒由高效吸附核酸的超顺磁性纳米微球和安全环保的提取试剂体系组成：经过独特的表面修饰的磁珠，结合核酸能力更强、洗脱更容易；操作步骤简单，操作时间短，可在室温下完成整个提取过程，适合于快速核酸提取的磁珠自动化过程。
操作流程（示意图）：
磁珠法病毒RNA提取试剂盒与国外试剂盒对照和随机阳性血清提取HCV病毒的应用实例见下。
1）医脉赛（EmerTher）磁珠法病毒RNA提取试剂盒随机阳性血清提取HCV病毒RNA进行荧光定量PCR检测
结果表明：1.医脉赛（Emerther）磁珠法病毒RNA提取试剂盒提取检测HCV扩增曲线佳；2.内参扩增曲线重复性好
2）磁珠法病毒RNA提取试剂盒与国外试剂盒相对照，图示为血浆样本检测病毒RNA的RT-PCR扩增曲线
| 目录号 | 规格 | 适用机型 |
|---|---|---|
| RE01001 | 20份 | 瓶装，适用于手工提取及Tecan、Hamilton等全自动移液工作站 |
| RE01002 | 100份 | 瓶装，适用于手工提取及Tecan、Hamilton等全自动移液工作站 |
| RE0196A | 96份 | Thermo Scientific KingFisher自动纯化系统 |
| RE0196B | 96份 | 医脉赛、圆点、奥盛、天隆、天根等品牌多种纯化机型 |
| RE0160C | 60份 | Thermo Scientific KingFisher mL磁珠提取仪 |
| RE0196D | 96份 | Thermo Scientific KingFisher Flex纯化系统 |
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【手动提取步骤】
1. 在离心管加入200µl样品溶液（咽拭子等）、15µl核酸提取磁珠悬浮液、 600µl裂解吸附液；
2. 置于旋转混和仪，温和混匀15min ；
3. 用磁分离架吸附磁珠，弃上清；
4. 加入600µl洗涤液I，振荡混合，洗涤磁珠1min，吸附磁珠，弃上清；
5. 加入600µl洗涤液II洗涤磁珠1min，吸附磁珠，弃上清；
6. 加入600µl洗涤液III洗涤磁珠1min，吸附磁珠，弃上清；
7. 再次加入600µl洗涤液III洗涤磁珠1min；
8. 吸附磁珠，弃上清后静置3-5min，去除乙醇残留；
9. 加入50µl洗脱液，温和混匀，洗脱5min；
10. 磁场吸附磁珠，回收含核酸洗脱液至另一RNase-free离心管内，用于后续检测或-20°C储存。
【自动化提取步骤（以32通道为例）】
1. RE0196B预装板设置（96孔深孔板，样品量200µl，16通量）
2. 从试剂盒中取出预分装96深孔板，轻甩96深孔板使试剂及磁珠均集中到96深孔板底部。使用前小心撕去铝箔封口膜，避免96深孔板振动，防止液体溅出（注意：室温低
于15°C时，请在开封使用前将96孔板置于37°C预热20min，以避免沉淀析出）；
3. 在第1列、第7列溶液中加入200µl待提取样本；
4. 放置2个8道磁套；选择附表所列的自动化提取程序，开始提取；客户可按所使用的核酸自动提取仪适当调整程序，如果有问题，请联系技术支持；
5. 转移第6列、第12列中含核酸的洗脱液至RNase-free离心管内，用于后续检测或-20°C储存。
| 次序 | 列号 | 程序 | 混合时间（sec.） | 磁吸时间（sec.） | 等待时间（sec.） | 体积（μl） | 混合速度 | 温度（℃） |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 1 | 1 | 裂解结合 | 900 | 20 | 0 | 800 | 快 | 37 |
| 2 | 2 | 洗涤1 | 120 | 20 | 0 | 600 | 快 | 室温 |
| 3 | 3 | 洗涤2 | 60 | 20 | 0 | 600 | 快 | 室温 |
| 4 | 4 | 洗涤3 | 60 | 30 | 0 | 600 | 快 | 室温 |
| 5 | 5 | 洗涤4 | 60 | 30 | 120 | 600 | 快 | 室温 |
| 6 | 6 | 洗脱 | 300 | 60 | 0 | 100 | 快 | 45 |
| 7 | 4 | 移去磁珠 | 30 | 0 | 0 | 600 | 快 | 室温 |
A. 病毒RNA得率低
1.取样前样品没有充分混匀。病毒样品取样前适当将样品震荡混匀。
2.磁珠加样量不足。请在吸取磁珠前将核酸提取磁珠悬液充分混匀。
3.与磁珠结合不充分。在RNA与磁珠结合过程中请温和摇匀，确保RNA与磁珠充分结合。
4.样品没有按照要求保存导致RNA降解。
B. 获得的RNA条带弥散，RNA片段断裂
1. 样品冷藏时间过久，没有按照要求冷冻保存。请使用新鲜及正确保藏的样品。
2. 操作过程过于剧烈，RNA被机械打断。请严格按照说明书操作。
C. RNA样品不纯，抑制或者干扰后续试验
1.样本裂解结合后没有进行磁珠转移更换离心管，导致管壁黏附的杂质污染最终提取物。
2.磁珠没有完全干燥，有乙醇残留。最后一次洗涤后尽量吸净离心管内的液体。
3. 加入洗脱液之前将磁珠静置5min左右，确保乙醇完全挥发。
