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氨基化磁珠

分类:氨基化磁珠目录:FE02

产品特性:

粒径:500nm
pH稳定性:pH 4-12
磁响应性:> 20emu/g
溶剂:20% 乙醇
结合能力:10-500μg/mg

医脉赛(EmerTher)氨基磁珠是表面含氨基官能团的超顺磁性纳米磁珠,用于共价结合氨基或羧基配体,偶联后的磁珠可通过磁场吸附从溶液中分离出来,直接用于下游的酶反应或大分子的免疫纯化分离等试验。

作用原理(示意图):


略。

目录号规格适用机型
FE0200120mg/ml,1ml
FE0200220mg/ml,5ml


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【手工实验步骤】
以下实验步骤提供EmerTher氨基磁珠的一般操作流程,具体实验中磁珠的用量可以适当调整。针对不同的用途,建议对偶合的条件(蛋白质浓度、偶联溶液、pH和孵育时间)进行相应的优化。EmerTher氨基磁珠的活化反应条件不只限于本文所述,其他常用活化条件也是适用的。
A. 磁珠活化
1. 使用前颠倒混匀磁珠;
2. 取50µl磁珠 (1mg) 放入微量离心管;
3. 将离心管放入磁力架, 吸附磁珠并去上清;
4. 用1ml偶联溶液洗涤磁珠,洗涤3次,每次洗涤完后吸附磁珠并去上清;
5. 将磁珠重悬于400µl 5% 戊二醛溶液,振荡混匀;
6. 温和旋转条件下,在室温反应3小时;
7. 吸附磁珠,弃上清;
8. 加入1ml偶联溶液洗涤磁珠除去未反应的戊二醛,洗涤3次,每次洗涤完后吸附磁珠并去上清。
B. 蛋白偶合
1. 在离心管中加入200µl蛋白溶液,重悬活化好的磁珠;将离心管放置于旋转混合仪,在室温下或4°C温和混合24小时;
2. 通过磁场分离磁珠,弃上清;
3. 加入800µl封闭溶液,振荡混匀,在室温下温和混匀30min;
4. 吸附磁场,弃上清;
5. 加入1ml洗涤缓冲液洗涤磁珠3次,每次洗涤完后吸附磁珠并去上清;
6. 将磁珠重悬于1ml洗涤缓冲液或其它合适的缓冲液,偶联蛋白后的磁珠储存于2-8°C。
C. 注意事项
1. 以上的操作流程适合于将含氨基的配体偶联在 EmerTher 氨基磁珠上。EmerTher氨基磁珠也可以与含羧基的配体偶联。一般常规的氨基磁珠反应也都适用。
2. 偶联溶液的离子强度对提高偶合效率很重要。一般来说,偶联溶液的离子强度越低越好,而且偶联溶液不应含任何氨基 (如Tris) 或羧基(如乙酸酯和柠檬酸),但洗涤缓冲液或保存液可以含氨基或羧基。
3. 反应的蛋白浓度需要优化,蛋白浓度太低会导致磁珠交联。对于昂贵的蛋白,如果蛋白浓度太低,可以加入别的蛋白(如BSA)占据剩余的反应活性位点。
4. 含戊二醛或吡啶的溶液具有挥发性和毒性,请在化学通风橱里进行相应操作。
5. 磁珠使用和保存过程中应避免冷冻、干燥和高速离心等操作,这些操作会降低磁珠结合能力。

1、偶联溶液的离子强度对偶合效率是否影响?
答:一般来说,偶联溶液的离子强度越低越好,而且偶联溶液不应含任何氨基 (如Tris) 或羧基(如乙酸酯和柠檬酸),但洗涤缓冲液或保存液可以含氨基或羧基。

2、反应的蛋白浓度是否需要优化?
答:蛋白浓度太低会导致磁珠交联。对于昂贵的蛋白,如果蛋白浓度太低,可以加入别的蛋白(如BSA)占据剩余的反应活性位点。