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琥珀酰亚胺(NHS)磁珠

分类:琥珀酰亚胺 (NHS) 修饰磁珠目录:FE04

产品特性:

粒径:300nm
pH稳定性:pH 4-12
磁响应性:>30emu/g
溶剂:20%乙醇
结合能力:10-100μg/mg

医脉赛(EmerTher)NHS磁珠是含NHS(琥珀酰亚胺)功能基团的超顺磁性纳米磁珠微球,可与核酸、蛋白、抗体或其它分子上的伯胺进行偶联反应形成稳定的酰胺键。偶联后的磁珠可通过磁场吸附从溶液中分离出来,直接用于下游的酶反应或大分子的免疫纯化分离等试验。

作用原理(示意图):


医脉赛(EmerTher)琥珀酰亚胺(HNS)磁珠与国际P品牌琥珀酰亚胺(NHS)磁珠提取效果对比的实例见下。

实验结果显示,医脉赛(EmerTher)琥珀酰亚胺(NHS)磁珠提取量高五倍,而且分散性好,不易结块。

目录号规格适用机型
FE0400120mg/ml,1ml
FE0400220mg/ml,5ml

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【手工实验步骤】
以下实验步骤提供EmerTher NHS磁珠的一般操作流程,实验中的试剂用量可根据反应物的多少而相应增减。针对不同的用途,建议对偶合的条件(蛋白质浓度,偶联缓冲液,pH和孵育时间)进行相应的优化,具体实验中磁珠的用量也可以适当调整。
1. 取50µl磁珠(1mg)于离心管中;
2. 加入1ml洗涤缓冲液洗涤磁珠,离心管置于磁力架上吸磁,弃上清;
3. 再次用1ml洗涤缓冲液洗涤磁珠,磁场吸附,弃上清;
4. 用5ml偶联缓冲液重悬磁珠,配成磁珠悬液,可超声分散;
5. 偶联蛋白溶液配制:将待偶联蛋白溶解在5ml偶联缓冲液中,蛋白浓度一般1-10 mg/ml;
6. 在5ml磁珠悬液中加入前一步骤配制好的5ml偶联蛋白溶液,将混合液置于旋转混合仪室温下混合2-4小时,或4°C过夜;
7. 磁场分离磁珠,移除含蛋白上清液;
8. 加入10ml封闭缓冲液,重悬磁珠,置于旋转混合仪室温下混合2-4hr,或4°C过夜;
9. 通过磁场分离磁珠;
10. 用1ml封闭缓冲液洗涤偶联蛋白的磁珠两次,每次15min,磁场吸附,弃上清;
11. 用1ml封闭缓冲液或合适的缓冲液悬浮磁珠;
12. 偶联后的磁珠于2-8°C储存。

A. 蛋白不溶于结合缓冲液,有什么好办法吗?
蛋白可能为疏水性的,溶解蛋白之前可在结合缓冲液中加入适量DMSO(最多20%)。

B. 结合效率低,有什么原因呢?
含有伯胺的缓冲液没有完全去除。请在蛋白结合之前对蛋白样品去盐或透析以完全去除伯胺(如Tris和glycine)。