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磁珠法组织RNA提取试剂盒

分类:组织RNA提取目录:RE03

产品特性:

高通量
环境安全
方便
稳定
自动化适用

本试剂盒适用于组织样本中RNA。试剂盒由高效吸附核酸的超顺磁性纳米微球和安全环保的提取试剂体系组成:经过独特的表面修饰的磁珠,结合核酸能力更强、洗脱更容易;操作步骤简单,操作时间短,可在室温下完成整个提取过程,适合于快速核酸提取的磁珠自动化过程。

操作流程(示意图):


医脉赛(EmerTher)磁珠法组织RNA提取试剂盒在提取虾肉组织RNA的应用实例见下。


目录号规格适用机型
RE0300120份瓶装,适用于手工提取及Tecan、Hamilton等全自动移液工作站
RE03002100份瓶装,适用于手工提取及Tecan、Hamilton等全自动移液工作站
RE0396B96份医脉赛、圆点、奥盛、天隆、天根等品牌多种纯化机型
RE0360C60份Thermo Scientific KingFisher mL磁珠提取仪
RE0396D96份Thermo Scientific KingFisher Flex纯化系统

我们提供了多种订购渠道和订购方式:
1.直接电话联系我们:400-880-7356;021-60556823
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【手工提取步骤】
1. 预处理过程:将新鲜组织用一次性刀片切成小块,称取10-40mg组织碎片于离心管中,加入300µl组织研磨液,加入钢珠或玻璃珠,使用组织研磨器充分研磨(缺乏研磨过程可能导致RNA得率降低); 离心10000g 5min,取200µl上清液至另一干净离心管中;
2. 加入30µl磁珠、600µl裂解吸附液;置于旋转混和仪,温和混匀10min,用磁分离架吸附磁珠,弃上清;
3. 加入600µl洗涤液I洗涤磁珠2min,吸附磁珠,弃上清;
4. 加入600µl洗涤液II洗涤磁珠2min,并转移至另一干净离心管中;
5. 吸附磁珠,弃上清;
6. 加入600µl洗涤液III洗涤磁珠1min,吸附磁珠,弃上清;
7. 再次加入600µl洗涤液III洗涤磁珠1min;吸附磁珠,弃上清,尽量吸除所有残留液体;
8. 静置3-5min,去除乙醇残留;
9. 加入100µl洗脱液,混合均匀,洗脱5min;
10. 磁场吸附磁珠,回收含核酸洗脱液至另一RNase-free离心管内,用于后续检测或保存于-20oC冰箱。

【自动化提取步骤(以32通道为例) 】
1. RE0396B预装板设置(96孔深孔板,样品量200µl,16通量)

2. 从试剂盒中取出预分装96深孔板,轻甩96深孔板使试剂及磁珠均集中到96深孔板底部。使用前小心撕去铝箔封口膜,避免96深孔板振动,防止液体溅出(注意:室温低于15°C时,请在开封使用前将96孔板置于37°C预热20min,以避免沉淀析出);
3. 在第1列、第7列溶液中加入200µl组织研磨后的上清液;
4. 放置2个8道磁套;选择附表所列的自动化提取程序,开始提取;客户可按所使用的核酸自动提取仪适当调整程序,如果有问题,请联系技术支持;
5. 转移第6列、第12列中含核酸的洗脱液至RNase-free离心管内,用于后续检测或-20°C储存。

次序列号程序混合时间(sec.)磁吸时间(sec.)等待时间(sec.)体积(μl)混合速度温度(℃)
11裂解6000080037
 22吸磁30200600室温
 31结合30020080037
 42洗涤1120200600室温
 53洗涤260200600室温
 64洗涤360300600室温
 75洗涤46030120600室温
 86洗脱30060010050
 94移去磁珠3000600室温


A. 组织RNA得率低
1.缺乏研磨过程可能导致RNA得率降低。
2.磁珠加样量不足。请在吸取磁珠前将核酸提取磁珠悬液充分混匀。
3.与磁珠结合不充分。在RNA与磁珠结合过程中请温和摇匀,确保RNA与磁珠充分结合。
4.样品没有按照要求保存导致RNA降解。

B. 获得的RNA条带弥散,RNA片段断裂
1.样品冷藏时间过久,没有按照要求冷冻保存。请使用新鲜及正确保藏的样品。
2.操作过程过于剧烈,RNA被机械打断。请严格按照说明书操作。

C. RNA样品不纯,抑制或者干扰后续试验
1.样本裂解结合后没有进行磁珠转移更换离心管,导致管壁黏附的杂质污染最终提取物。
2.磁珠没有完全干燥,有乙醇残留。最后一次洗涤后尽量吸净离心管内的液体。
3.加入洗脱液之前将磁珠静置5min左右,确保乙醇完全挥发。