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磁珠法粪便RNA提取试剂盒

分类:粪便RNA提取目录:RE12

产品特性:

高通量:自动快速完成粪便RNA提取
方便:全程均可在室温下进行
稳定:保护易降解RNA
环境安全:不含苯酚、氯仿等有机试剂
自动化适用

本试剂盒适用于提取粪便样本中RNA。试剂盒由高效吸附核酸的超顺磁性纳米微球和安全环保的提取试剂体系组成:经过独特的表面修饰的磁珠,结合核酸能力更强、洗脱更容易;操作步骤简单,操作时间短,可在室温下完成整个提取过程,适合于快速核酸提取的磁珠自动化过程。

操作流程(示意图):

医脉赛(EmerTher)磁珠法粪便RNA提取试剂盒在提取粪便RNA的应用实例见下。



目录号规格适用机型
RE1200120份瓶装,适用于手工提取及Tecan、Hamilton等全自动移液工作站
RE12002100份瓶装,适用于手工提取及Tecan、Hamilton等全自动移液工作站
RE1296B96份医脉赛、圆点、奥盛、天隆、天根等品牌多种纯化机型
RE1260C60份Thermo Scientific KingFisher mL磁珠提取仪
RE1296D96份Thermo Scientific KingFisher Flex纯化系统

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【手工提取步骤】
1. 取100-200mg的粪便样本于2ml含玻璃珠及组织消化液的研磨离心管中 (若粪便样本为液态,取200μl于离心管中),使用四维旋转混匀仪漩涡混匀(40Hz,240s)【粪便样本病毒RNA提取: 取50-100mg的粪便样本于2ml离心管(若粪便样本为液态,取200μl于离心管中), 加入400ul组织消化液,使用漩涡仪混匀1min】
2. 上述样本3000g,离心5min,上清液为预处理后提取样本;
3. 取离心后上清液200µl,加入600µl 裂解吸附液,15µl磁珠,置于旋转混和仪,温和混匀15min ;
4. 用磁分离架吸附磁珠,弃上清;
5. 加入600µl洗涤液I洗涤磁珠1min,吸附磁珠,弃上清;
6. 加入600µl洗涤液II洗涤磁珠1min,吸附磁珠,弃上清;
7. 加入600µl洗涤液III洗涤磁珠1min,吸附磁珠,弃上清;
8. 再次加入600µl洗涤液III洗涤磁珠1min;
9. 吸附磁珠,弃上清后静置3-5min,去除乙醇残留;
10. 加入50µl洗脱液,温和混匀,洗脱5min;
11. 磁场吸附磁珠,回收含核酸洗脱液至另一RNase-free离心管内,用于后续检测或-20°C储存。

【自动化提取步骤(以32通道为例)】
1. RE1296B预装板设置(96孔深孔板,样品量200µl,16通量)

2. 从试剂盒中取出预分装96深孔板,轻甩96深孔板使试剂及磁珠均集中到96深孔板底部。使用前小心撕去铝箔封口膜,避免96深孔板振动,防止液体溅出(注意:室温低于15°C时,请在开封使用前将96孔板置于37°C预热20min,以避免沉淀析出);
3. 在第1列、第7列溶液中加入200µl预处理后的样本(见实验步骤1-2);
4. 放置2个8道磁套;选择附表所列的自动化提取程序,开始提取;客户可按所使用的核酸自动提取仪适当调整程序,如果有问题,请联系技术支持。
5. 转移第6列、第12列中含核酸的洗脱液至RNase-free离心管内,用于后续检测或-20°C储存。

次序列号程序混合时间(sec.)磁吸时间(sec.)等待时间(sec.)体积(μl)混合速度温度(℃)
11裂解3000080037
22吸磁30200600室温
31结合60020080037
42洗涤1120200600室温
53洗涤260200600室温
64洗涤360300600室温
75洗涤46030120600室温
86洗脱3006005050
94移去磁珠30600 室温


A. 粪便RNA得率低
1.取样前样品没有充分研磨。粪便样品取样前将样品充分研磨。
2.磁珠加样量不足。请在吸取磁珠前将核酸提取磁珠悬液充分混匀。
3.与磁珠结合不充分。在RNA与磁珠结合过程中请温和摇匀,确保RNA与磁珠充分结合。
4.样品没有按照要求保存导致RNA降解。

B. 获得的RNA条带弥散,RNA片段断裂
1. 样品冷藏时间过久,没有按照要求冷冻保存。请使用新鲜及正确保藏的样品。
2. 操作过程过于剧烈,RNA被机械打断。请严格按照说明书操作。

C. RNA样品不纯,抑制或者干扰后续试验
1. 样本裂解结合后没有进行磁珠转移更换离心管,导致管壁黏附的杂质污染最终提取物。
2. 磁珠没有完全干燥,有乙醇残留。最后一次洗涤后尽量吸净离心管内的液体。
3. 加入洗脱液之前将磁珠静置5min左右,确保乙醇完全挥发。