核酸、蛋白、抗体或其它分子上的游离巯基进行偶联反应形成稳定的共价硫醚键，以分离含巯基的核酸、蛋白、抗体等分子。

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【手工实验步骤】
以下实验步骤提供EmerTher 马来酰亚胺磁珠的一般操作流程，实验中的试剂用量可根据反应物的多少而相应增减。针对不同的用途，建议对偶合的条件（蛋白质浓度，偶联缓冲液，pH和孵育时间）进行相应的优化，具体实验中磁珠的用量也可以适当调整。
结合过程:
1. 将磁珠均匀混悬后，取50µl磁珠（1mg）于离心管中；将离心管置于磁力架上吸磁，弃上清；
2. 加入1ml洗涤缓冲液洗涤磁珠，将离心管置于磁力架上吸磁，弃上清；
3. 再用洗涤缓冲液（每次1ml）洗涤磁珠两次，磁场吸附，弃上清；
4. 用5ml偶联缓冲液重悬磁珠；
5. 在5ml磁珠悬液中加入配制好的5ml蛋白溶液，将混合液置于旋转混合仪上，于4°C混合孵育4-16hr；
6. 加入2ml封闭缓冲液，置于旋转混合仪，于4°C混合孵育过夜；
7. 通过磁场分离磁珠，弃上清（如有需要，也可保留上清作分析用）；
8. 用洗涤缓冲液（每次1ml）洗涤偶联蛋白的磁珠两次，磁场吸附，弃上清；
9. 用一定体积的洗涤缓冲液或其它合适的缓冲液悬浮磁珠；
10. 偶联后的磁珠于2-8°C储存。

1、缓冲液pH值对结合效果是否有明显影响？
答：马来酰亚胺在pH 6.5-7.5的溶液里会与游离巯基反应形成稳定的共价硫醚键；在pH> 7.5时，马来酰亚胺则与胺基反应。所以配制缓冲液时，pH值要调节准确。

2、螯合溶液中如有游离的二价金属离子，是否会有影响？
答：EDTA用于螯合溶液中游离的二价金属离子，以避免这些金属离子导致非反应性巯基的氧化。

3、实验过程中对蛋白浓度是否有要求？
答：反应的蛋白浓度需要优化，蛋白浓度太低会导致磁珠交联。