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羧基化磁珠

分类:羧基化磁珠目录:FE03

产品特性:

粒径:300nm
pH稳定性:pH 4-12
磁响应性:>30emu/g
溶剂:20%乙醇
结合能力:每mg磁珠结合10-100μg

医脉赛(EmerTher)羧基化磁珠是包被有羧酸官能团的超顺磁性纳米微球,可以在被活化后(例如使用EDC和磺基-NHS活化),与核酸、蛋白质、抗体或其它分子上的伯胺进行偶联反应以形成稳定的酰胺键。偶联后的磁珠可通过磁场吸附从溶液中分离出来,直接用于下游的酶反应或大分子的免疫纯化分离等试验。

作用原理(示意图):


略。

目录号规格适用机型
FE0300120mg/ml,1ml
FE0300220mg/ml,5ml略 

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以下实验步骤提供EmerTher羧基磁珠的一般操作流程。具体实验中磁珠的用量可以适当调整。 针对不同的用途,建议对偶合的条件(蛋白质浓度、偶联缓冲液、 pH和孵育时间)进行相应的优化。EmerTher羧基磁珠的活化反应条件不只限于本文所述,其他常用活化条件也是适用的。

EDC/Sulfo-NHS活化和偶联步骤:
Step 1.活化
1. 使用前颠倒混匀磁珠;
2. 取50µl磁珠 (1 mg) 到微量离心管;
3. 将离心管放入磁力架,吸附磁珠并去上清;
4. 用1ml活化缓冲液洗涤磁珠,洗涤3次后,用1ml活化缓冲液重悬磁珠;
5. 同时加入5mg EDC和5mg sulfo-NHS,振荡混匀;
6. 室温下反应15min;
7. 磁场吸附,弃液体;
8. 加入1ml活化缓冲液洗涤磁珠,吸附磁珠并去上清;
9. 用5ml活化缓冲液重悬磁珠;
Step 2. 偶联
1. 偶联蛋白溶液配制:蛋白溶解在5ml偶联缓冲液中. 蛋白浓度一般1-10 mg/ml;
2. 在5ml磁珠悬液中加入5ml蛋白溶液,置于旋转混合仪室温下反应2-4hr,或4°C过夜;
3. 磁场分离磁珠,移除含蛋白上清液;
4. 加入10ml封闭液,重悬磁珠,置于旋转混合仪室温下混合2-4hr,或4°C过夜;
5. 通过磁场分离磁珠,去上清;
6. 用1ml封闭缓冲液洗涤偶联蛋白的磁珠两次,每次15min,吸附磁珠并去上清;
7. 用1ml封闭缓冲液或合适的缓冲液悬浮磁珠;
8. 偶联后的磁珠于2-8°C储存。

1、蛋白不溶于结合缓冲液?
答:蛋白可能为疏水性的,溶解蛋白之前可在结合缓冲液中加入适量DMSO(最多20%)。

2、结合效率低?
答:含有伯胺的缓冲液没有完全去除。请在蛋白结合之前对蛋白样品去盐或透析以完全去除伯胺(如Tris和glycine)。