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磁珠法石蜡包埋样品DNA提取试剂盒

分类:石蜡包埋样本DNA提取目录:DE02

产品特性:

保护操作人员健康,环境安全
高通量:快速完成石蜡包埋样本DNA提取
增强肿瘤和其他疾病诊断和靶向治疗准确性
高效去交联效果
自动化适用

本试剂盒用于石蜡包埋组织中基因组DNA的提取。试剂盒不使用二甲苯作为石蜡溶剂,从而增加操作人员和环境的安全性;经过独特的表面修饰的磁珠,结合核酸能力更强,洗脱更容易;操作步骤简单,适合于基因组DNA的磁珠自动化提取过程。本试剂盒纯化的DNA可直接用于各种下游操作,包括PCR、文库构建、测序分析等。

操作流程(示意图):

医脉赛(EmerTher)磁珠法石蜡包埋样本DNA提取试剂盒在肿瘤病人FFPE样本提取核酸的应用实例、与国际金标准试剂盒比较和通过石蜡包埋样本所提取的gDNA的real-time PCR实验验证提取效果的实例见下。

医脉赛(EmerTher)磁珠法石蜡包埋样本DNA提取试剂盒在肿瘤病人FFPE样本提取核酸的应用实例。
1.样本
四名肿瘤病人FFPE样本(3片10μm厚的石蜡切片组织样本/每人)

2.试剂
Emerther磁珠法石蜡包埋样本DNA提取试剂盒

3.核酸提取方法
EmerTher磁珠法石蜡包埋样本DNA提取试剂盒,用自动核酸提取仪提取

A、 脱蜡
1. 溶解蛋白酶K:按标签所示,吸取PK溶解液至蛋白酶K干粉中配制成蛋白酶K溶液20mg/ml,颠倒混匀数次让蛋白酶K充分溶解;
2. 取一定量石蜡包埋组织(如1-5片10µm厚的石蜡切片组织样本),转移至1.5ml离心管中;
3. 加入300µl石蜡样本液,150µl ATL和20µl蛋白酶K溶液,置于56°C 恒温水浴锅孵育1hr ,期间混匀3-5次。也可消化过夜;
B、消化
4. 在组织样本中加入150µl石蜡消化液,置于85°C恒温水浴锅孵育30min;
C、 DNA提取
5. 15000g离心5min;
6. 小心吸取全部下层液体,加入375µl裂解吸附液、30µl核酸提取磁珠,置于旋转混合仪,温和混匀20min;
7. 用磁分离架吸附磁珠1min,弃上清;
8. 加入700µl洗涤液I洗涤磁珠,颠倒混匀洗涤1min,吸附磁珠,弃上清;
9. 再次加入700µl洗涤液I洗涤磁珠1min,吸附磁珠,弃上清;
10. 加入700µl洗涤液II洗涤磁珠1min,吸附磁珠,弃上清;
11. 再次加入700µl洗涤液II洗涤磁珠1min,吸附磁珠;
12. 尽量吸弃上清后静置5min,去除乙醇残留;
13. 加入100µl洗脱液,50°C混合均匀洗脱5min;
14. 磁场吸附磁珠,回收含基因组DNA的洗脱液至另一干净离心管内;
15. 用于后续检测或-20℃储存。

4.结果:提取的DNA产量高、纯度高,方便进行下一步的PCR扩增。



医脉赛(EmerTher)磁珠法石蜡包埋样本DNA提取试剂盒与目前市场上国际金标准试剂盒的比较。



医脉赛(EmerTher)磁珠法石蜡包埋样本DNA提取试剂盒所提取gDNA的real-time PCR实验,用以验证医脉赛(Emerther)磁珠法石蜡包埋样本DNA提取效果。(石蜡包埋样本编号:1603089)

实验结论
用医脉赛(EmerTher)石蜡包埋样本DNA提取试剂盒从5片石蜡样本切片中大约可以提取4微克genomic DNA。用所得gDNA做GAPDH的real-time PCR获得曲线较好,且提取所得DNA的OD值(260/280)分别为1.81,1.90,说明所得DNA质量良好。由于该DAN提取试剂盒所提取的DNA量较多,且质量良好,证明试剂盒效果良好。


目录号规格适用机型 
DE0200120份瓶装,适用于手工提取及Tecan、Hamilton等全自动移液工作站
DE02002100份瓶装,适用于手工提取及Tecan、Hamilton等全自动移液工作站
DE0296B96份医脉赛、圆点、奥盛、天隆、天根等品牌多种纯化机型
DE0260C60份Thermo Scientific KingFisher mL磁珠提取仪
DE0296D96份Thermo Scientific KingFisher Flex纯化系统

我们提供了多种订购渠道和订购方式:
1.直接电话联系我们:400-880-7356;021-60556823
2.直接邮箱联系我们:order@emerther.cn
3.直接点击“在线预订”,即可跳转第三方页面,按照第三方页面流程点击“立即订购”即可(具体操作可参考以下视图)。


【手动提取步骤】
A、 脱蜡
1. 溶解蛋白酶K:按标签所示,吸取PK溶解液至蛋白酶K干粉中配制成蛋白酶K溶液20mg/ml,颠倒混匀数次让蛋白酶K充分溶解;
2. 取一定量石蜡包埋组织(如1-5片10µm厚的石蜡切片组织样本),转移至1.5ml离心管中;
3. 加入300µl石蜡样本液,150µlATL和20µl蛋白酶K,置于56°C 恒温水浴锅孵育1hr,期间混匀3-5次。也可消化过夜;
B、消化
4. 在组织样本中加入150µl石蜡消化液,置于85oC恒温水浴锅孵育30min;
C、DNA提取
5. 15000g离心5min;
6. 小心吸取全部下层液体,加入375µl裂解吸附液、30µl核酸提取磁珠,置于旋转混合仪,温和混匀20min;
7. 用磁分离架吸附磁珠1min,弃上清;
8. 加入700µl洗涤液I洗涤磁珠,颠倒混匀洗涤1min,吸附磁珠,弃上清;
9. 再次加入700µl洗涤液I洗涤磁珠1min,吸附磁珠,弃上清;
10. 加入700µl洗涤液II洗涤磁珠1min,吸附磁珠,弃上清;
11. 再次加入700µl洗涤液II洗涤磁珠1min,吸附磁珠;
12. 尽量吸弃上清后静置5min,去除乙醇残留;
13. 加入100µl洗脱液,50°C混合均匀洗脱5min;
14. 磁场吸附磁珠,回收含基因组DNA的洗脱液至另一干净离心管内;
15. 用于后续检测或-20℃储存。

【自动化提取步骤(以32通道为例)】
1.DE0296B预装板设置(96空深孔板,样品量:15000g离心后取全部下层液体,16通量)


2.从试剂盒中取出预分装96深孔板,轻甩96深孔板使试剂及磁珠均集中到96深孔板底部。使用前小心撕去铝箔封口膜,避免96深孔板振动,防止液体溅出(注意:室温低于15℃时,请在开封使用前将96孔板置于37℃预热20min,以避免沉淀析出);
3.在第1列、第7列中加入脱蜡消化后的全部样本(下层液体);
4.放置2个8道磁套;根据附表所列的自动化提取程序,开始提取;客户可按所使用的核酸自动提取仪适当调整程序,如果有问题,请联系技术支持;
5.转移第6列、第12列中含核酸的洗脱液,用于后续检测或-20℃储存。

步骤空位名称
混合时间
(sec.)
磁吸时间
(sec.)
等待时间
(sec.)
容积
(μl)
混合速度温度(℃)
11裂解6000070037
22吸磁30300750室温
31结合30030070037
42洗涤1120200700室温
53洗涤2120200700室温
64洗涤3120200700室温
75洗涤412030120700室温
86洗脱30060010050
94移去磁珠3000700室温 


1、试剂中是否还有有毒试剂?
我们的试剂不含有二甲苯等有毒试剂,可以在保护实验室操作人的安全下快速方便的进行提取。

2、过夜消化与消化3h的差异?
过夜消化的提取效果更好,但是要是时间紧迫,3h消化液足以满足实验要求。