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磁珠法基因组DNA提取试剂盒

分类:基因组DNA提取目录:DE01

产品特性:

高通量:40min即可完成提取过程
环境安全:不含有害有机溶剂
抗凝剂普适:可用于各种抗凝剂
自动化适用:提供预装板适配核酸自动提取仪

本试剂盒用于血浆、血清、悬浮细胞等液体样本基因组DNA提取。试剂盒基于高效吸附核酸的超顺磁性纳米微球和提取试剂体系组成:经过独特的表面修饰的磁珠,结合核酸能力更强;洗脱容易,使用TE缓冲液或水即可将基因组DNA从磁珠上洗脱下来;操作简单、快速,适用于基因组DNA的磁珠自动化提取过程。本试剂盒纯化的基因组DNA可适用于各种下游操作,包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交、基因测序等实验。

操作流程(示意图例):

医脉赛(EmerTher)磁珠法基因组DNA提取试剂盒在胃液样本提取幽门螺杆菌核酸的应用实例见下。

1.标本
快速尿素酶阳性(RUT+)胃液标本35例

2.试剂
①EmerTher磁珠法基因组DNA提取试剂盒;②QIAamp DNA Mini Kit (QIAGEN)。

3.标本核酸提取方法
胃液预处理
取1ml的胃液加入1.5ml的离心管中,加入等量的Tris缓冲液(0.67M,pH7.4),振荡均匀,室温放置2h。13000rpm离心5min,弃上清留沉淀。

EmerTher磁珠法基因组DNA提取试剂盒:
• 经预处理的胃液沉淀中加入700μl 裂解吸附液,混和均匀,裂解细胞6min;
• 加入30μl磁珠悬浮液,振荡混合10min。用磁分离架吸附磁珠,弃上清;
• 加入800μl 洗涤液I 洗涤磁珠,吸附磁珠,弃上清;
• 再次加入800μl洗涤液I 洗涤磁珠,吸附磁珠,弃上清;
• 加入800μl 洗涤液II 洗涤磁珠,吸附磁珠,弃上清;
• 再次加入800μl 洗涤液II 洗涤磁珠,吸附磁珠,弃上清后静置3-6min,去除乙醇残留;
• 加入 100μl Nuclease-Free Water,混和均匀后洗脱5min;
• 吸附磁珠,回收含基因组DNA的洗脱液至另一离心管,进行DNA检测及后续实验。

QIAamp DNA Mini Kit按照说明书进行并改进,具体步骤如下:
• 在沉淀中加入180μl ATL和20μl 蛋白酶K,振荡混匀。将离心管置于金属浴或空气摇床中,56°C振荡2h。
• 从金属浴或空气摇床中取出离心管,进行短暂离心。在离心管中加入200μl AL,振荡混匀。
• 离心管置于金属浴中,70°C 振荡10min,将离心管短暂离心。
• 在离心管中加入200μl 新鲜的无水乙醇,振荡混匀,短暂离心。
• 将离心管中的液体全部转入到Qiagen柱中。8000rpm离心1min,弃去废液,保留柱子。
• 将柱子转入到一个新的废液收集管中,加AW1 500μl。8000rpm离心1min,弃去废液,保留柱子。
• 将柱子转入到一个新的废液收集管,加AW2 500μl。13000rpm离心3min, 弃去废液,保留柱子。
• 将柱子转入到一个新的废液收集管中,最高转速离心1min。将柱子转入到一个新的1.5ml离心管,在生物安全柜中打开盖,晾2min。
• 在柱子中加入100μl buffer AE,盖盖放置5min。8000rpm离心1min,收集洗脱出的液体(含目标DNA)。
• 将收集的含DNA液体重新加入柱子中,盖上盖子放置5min。8000rpm离心1min,收集DNA,弃去柱子。
• 将收集到的DNA分装出2份,每份25μl。将提取到的DNA置-80℃冷冻保存。

4.结果
两种核酸提取方法用于临床标本检测的比较
胃液标本35例(RUT+),分别用上述两种提取方法抽提HP核酸模板,实验反应体系及反应条件见上,荧光定量检测结果如表1和图1所示。比较两种提取方法在测定HP特异基因及内参基因的差别是否具有统计学意义,采用多元方差分析,Wilks’λ=0.96,F=0.73,P=0.49>0.05,结果表明两种核酸提取方法在检测HP特异基因及内参基因的效果相当,说明两种提取方法在临床标本中的检测能力无显著差别。
两种核酸抽提方法,EmerTher的操作过程简单、时间短,提取效率及临床标本检测能力与QIAGEN相当,在大规模临床标本筛查时应优先选择性价比高的提取方法。



目录号规格适用机型
DE0100120份瓶装,适用于手工提取及Tecan、Hamilton等全自动移液工作站
DE01002100份瓶装,适用于手工提取及Tecan、Hamilton等全自动移液工作站
DE01003500份瓶装,适用于手工提取及Tecan、Hamilton等全自动移液工作站
DE0196A96份Thermo Scientific KingFisher等多种自动磁珠纯化仪
DE0196B96份医脉赛、圆点、奥盛、天隆、天根等品牌多种纯化机型
DE0160C60份Thermo Scientific KingFisher mL等多种自动磁珠纯化仪
DE0196D96份Thermo Scientific KingFisher Flex等多种自动磁珠纯化仪

我们提供了多种订购渠道和订购方式我们提供了多种订购渠道和订购方式:
1.直接电话联系我们:400-880-7356;021-60556823
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【手工提取步骤】
1. 溶解蛋白酶K:按标签所示,吸取PK溶解液至蛋白酶K干粉中配制成蛋白酶K溶液20mg/ml,颠倒混匀数次让蛋白酶K充分溶解;
2. 取200-300µl液体样本放入2ml离心管中,加入20μl蛋白酶K溶液、700µl裂解吸附液、30µl磁珠;
3. 置于旋转混和仪,充分混匀30min;
4. 用磁分离架吸附磁珠1min,弃上清液;
5. 加入800µl洗涤液I洗涤磁珠,将含磁珠的洗涤液转移至另一干净离心管中,颠倒混匀洗涤10min,吸附磁珠,弃上清液;
6. 加入800µl洗涤液I洗涤磁珠3min,吸附磁珠,弃上清液;
7. 加入800µl洗涤液II洗涤磁珠3min,吸附磁珠,弃上清液;
8. 再次加入800µl洗涤液II洗涤磁珠3min,吸附磁珠,弃上清液后静置5min,去除乙醇残留;
9. 加入100µl洗脱液,60℃混合洗脱10min;
10. 磁场吸附磁珠,回收含基因组DNA的洗脱液至另一离心管,用于后续检测或-20°C储存。

【自动化提取步骤(以32通道为例)】
1. DE0196B预装板设置(96孔板深孔板,样品量200μl,16通量)


2.从试剂盒中取出预封装96深孔板,轻甩96深孔板使试剂及磁珠均集中到96深孔板底部。使用前小心撕去铝箔封口膜,避免96深孔板振动,防止液体溅出(注意:室温低于15℃时,请在使用前将96孔板置于37℃预热20min,以避免沉淀析出);
3.在第1列、第7列中加入200μl样本和20μl蛋白酶K溶液;
4.放置2个8道磁套;选择附表所列的自动化提取程序,开始提取;客户可按所使用的核算自动提取仪适当调整程序,如有问题,请联系技术支持;
5.转移第6列、第12列中含核酸的洗脱液,用于后续检测或-20℃储存。

次序列号程序混合时间(sec.)磁吸时间(sec.)等待时间(sec.)体积(μL)混合速度温度(℃)
11裂解9000090050
22吸磁30200800室温
31结合60030090050
42洗涤1600200800室温
53洗涤2240200800室温
64洗涤3180200800室温
75洗涤418030120800室温
86洗脱42060015070
94移动磁场3000800室温

1、血液样本基因组DNA提取方法?
答:磁珠法全血样本基因组DNA提取通常分为两类:
一步裂解法:将全血样本直接加入裂解结合液后上机提取;
两步裂解法:将全血样本与红细胞裂解液混合,待红细胞细胞膜破裂后,离心收集白细胞,加入裂解结合液后上机提取。


一步裂解法适应于各种血液,包括新鲜血液、冻存血液、去血浆血细胞等,通常血液处理量为10µl到300µl;
两步裂解法适用于白细胞结构完整的新鲜血液,通过离心后可对毫升级血液中白细胞进行富集后提取,可获得大量基因组DNA;因操作过程涉及裂解红细胞及离心收集白细胞,需注意保存样本中血细胞结构完整,过程较为繁琐。

2、在哪些情况下选择血液作为分子诊断DNA的来源
采用非侵入性的唾液及拭子采样可对遗传信息进行普通遗传分析,在下列情况下,推荐通过血液作为样本做为核酸来源:
1)需去除外源核酸干扰的分析,如二代测序NGS等;
2)细胞内寄生等感染性疾病检测;
3)白细胞、造血细胞及血小板基因及变异分析;
4)临床个性化及靶向用药分析;
5)其他适应的条件。