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磁珠法血浆游离DNA提取试剂盒

分类:血浆游离DNA提取目录:DE03

产品特性:

高通量
操作灵活
提取效率高
自动化适用

本试剂盒适合于从血浆等无细胞组织液中提取游离DNA(Circulating free DNA, cfDNA)片段。试剂盒由高效吸附核酸的超顺磁性纳米微球和安全环保的提取试剂体系组成:含经过独特的表面修饰的磁珠,结合核酸能力更强、洗脱更容易,使用水即可将核酸从磁珠上洗脱下来;纯化的DNA片段可直接用于各种下游操作,包括基因测序(例如无创产前基因检测、肿瘤检测)、文库构建等。本产品可用于自动化核酸提取仪上提取微量DNA。

操作流程(示意图):


医脉赛磁珠法血浆游离DNA提取试剂盒在人血浆样本提取cfDNA的应用实例见下。

1)用医脉赛磁珠法cfDNA提取试剂盒对23个不同人血浆样本(5个肿瘤患者,18个体检者)使用自动化核酸提取仪提取cfDNA,50μL洗脱液洗脱。

cfDNA浓度使用AccuBlue High Sensitivity dsDNA Auantitation Kit检测,23个样本检测结果如下


2)使用医脉赛磁珠法cfDNA提取试剂盒提取cfDNA后的Agilent 2100测试结果:

目录号规格适用机型
DE0300120份瓶装,适用于手工提取及Tecan、Hamilton等全自动移液工作站
DE03002100份瓶装,适用于手工提取及Tecan、Hamilton等全自动移液工作站
DE0301120份瓶装,适用于手工提取及Tecan、Hamilton等全自动移液工作站
DE03012100份瓶装,适用于手工提取及Tecan、Hamilton等全自动移液工作站
DE0302120份瓶装,适用于手工提取及Tecan、Hamilton等全自动移液工作站
DE03022100份瓶装,适用于手工提取及Tecan、Hamilton等全自动移液工作站
DE0304120份瓶装,适用于手工提取及Tecan、Hamilton等全自动移液工作站
DE03042100份瓶装,适用于手工提取及Tecan、Hamilton等全自动移液工作站

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【手工提取步骤(样本的提取体积可变,一次可处理200μl-4ml血浆样本,以下以400μl和2ml为例说明)】
[A] 400µl样本量实验步骤:
1. 将蛋白酶K和PK溶解液混合,配制成蛋白酶K溶液(20mg/ml);
2. 取400µl血浆样品至2ml 离心管中注1,加入40µl蛋白消化液、10µl蛋白酶K溶液, 混匀后56oC孵育15min;
3. 取出离心管,加入500µl核酸结合液、10µl核酸提取磁珠,置于旋转混合仪,温和混匀30min;
4. 用磁分离架吸附磁珠1min,弃上清;
5. 加入500µl洗涤液 I 洗涤磁珠,颠倒混匀洗涤2min,吸附磁珠,弃上清;
6. 加入500µl洗涤液 II,将溶液转移至干净的离心管中;
7. 洗涤磁珠2min,吸附磁珠,弃上清;
8. 尽量吸除残留液体后,静置2min注2,去除乙醇残留;
9. 加入30µl洗脱液 (TE缓冲液或双蒸水适用),混合均匀,置于56℃水浴洗脱5min;
10. 磁场吸附磁珠,回收含cfDNA的洗脱液至另一干净离心管内;
11. 进行DNA检测及后续实验。
[B] 2ml样本量实验步骤
1. 将蛋白酶K和PK溶解液混合,配制成蛋白酶K溶液(20mg/ml);
2. 取2ml血浆样品至10ml 离心管中注1,加入200µl蛋白消化液、50µl蛋白酶K溶液,混匀后56oC孵育15min;
3. 取出离心管,加入2500µl核酸结合液、50µl核酸提取磁珠,置于旋转混合仪,温和混匀30min;
4. 用磁分离架吸附磁珠1min,弃上清;
5. 加入1000µl洗涤液 I 洗涤磁珠,转移至2ml新离心管注1,颠倒混匀洗涤2min,吸附磁珠,弃上清;
6. 加入1000µl洗涤液 II, 将液体转移至干净的离心管;
7. 洗涤磁珠2min,吸附磁珠,弃上清;
8. 尽量吸除残留液体后,静置2min注2,去除乙醇残留;
9. 加入50µl洗脱液 (TE缓冲液或ddH2O适用),混合均匀,置于56oC水浴洗脱5min;
10. 磁场吸附磁珠,回收含cfDNA的洗脱液至另一干净离心管内;
11. 进行DNA检测及后续实验。

1.手动提取过程中有什么需要注意的呢?
• 洗涤液II洗涤后,尽量将残留液体去除后,让样品静置2-5min左右以挥发乙醇,然后加入洗脱液。如乙醇残留太多会对后续检测有一定影响;但样品如果过于干燥,可能导致DNA不容易从磁珠上洗脱下来,减少提取量。
• 洗脱液量和洗脱次数:减少洗脱液量可提高提取浓度,但可能降低总提取量;同等体积的洗脱液少量多次洗脱可提高总提取量。
• 洗脱时轻微振荡离心管有助于核酸溶解。