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磁珠法病毒DNA提取试剂盒

分类:病毒DNA提取目录:DE06

产品特性:

高通量:快速完成病毒DNA提取过程
方便:无需高温洗脱,减少挥发和交叉污染
生物安全:第一步操作即裂解细胞、变性蛋白
自动化适用

本试剂盒用于提取血清、血浆、咽拭子等液体样本中的病毒核酸(DNA)。试剂盒由高效吸附核酸的超顺磁性纳米微球和安全环保的提取试剂体系组成:经过独特的表面修饰的磁珠,结合核酸能力更强;操作步骤简单,操作时间短,整个操作过程可在室温下进行,适合于病毒DNA的磁珠自动化提取过程。

操作流程(示意图):


医脉赛(EmerTher)磁珠法病毒DNA提取试剂盒在血清梯度样本提取HBV病毒的应用实例见下。

1)从血清梯度样本提取HBV病毒DNA进行荧光定量PCR检测
     · 提取的病毒DNA检测扩增曲线的浓度线性程度佳
     · 更好去除PCR抑制剂,内参扩增曲线重复性好
     · 常温提取,减少溶剂挥发和交叉污染

2)两种磁珠法病毒DNA提取试剂的比较(样本检测DNA病毒RT-PCR扩增曲线如下:E代表使用医脉赛磁珠法病毒核酸提取试剂盒的结果,CON代表使用对照国外试剂盒的结果)

目录号规格适用机型
DE0600120份瓶装,适用于手工提取及Tecan、Hamilton等自动移液工作站
DE06002100份瓶装,适用于手工提取及Tecan、Hamilton等自动移液工作站
DE06003500份瓶装,适用于手工提取及Tecan、Hamilton等自动移液工作站
DE0696A96份Thermo Scientific KingFisher自动纯化系统
DE0696B96份医脉赛、圆点、奥盛、天隆、天根等品牌多种纯化机型
DE0660C60份Thermo Scientific KingFisher mL磁珠提取仪
DE0696D96份Thermo Scientific KingFisher Flex纯化系统 

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【手动提取步骤】
1. 溶解蛋白酶K:按标签所示,吸取PK溶解液至蛋白酶K干粉中配制成蛋白酶K溶液20mg/ml,颠倒混匀数次让蛋白酶K充分溶解;
2. 将液体样本混合均匀,取200µl样本放入2ml离心管中,加入20μl蛋白酶K、700µl裂解吸附液、30µl提取磁珠,置于旋转混和仪,充分混匀20min;
3. 用磁分离架吸附磁珠,弃上清液;
4. 加入700µl洗涤液I洗涤磁珠,将含磁珠的洗涤液转移至另一干净离心管中,颠倒混匀洗涤1min,吸附磁珠,弃上清液;
5. 加入700µl洗涤液II洗涤磁珠1min;
6. 吸附磁珠,弃上清液后静置5min,去除乙醇残留;
7. 加入60µl洗脱液,混和洗脱5min;
8. 磁场吸附磁珠,回收含病毒DNA的洗脱液至另一离心管,进行DNA检测及后续实验。

【自动化核酸提取流程(以32通道为例)】
1.DE0696B预装板设置(96孔深孔板,样品量200µl,16通量)


2.从试剂盒中取出预封装96深孔板,轻甩96深孔板使试剂及磁珠均集中到96深孔板底部。使用前小心撕去铝箔封口膜,避免96深孔板振动,防止液体溅出(注意:室温低于15°C时,请在使用前将96孔板置于37°C预热20min,以避免沉淀析出);
3.在第1列、第7列中加入200µl样本和20μl蛋白酶K溶液;
4.放置2个8道磁套;选择附表所列的自动化提取程序,开始提取;客户可按所使用的核酸自动提取仪适当调整程序,如果有问题,请联系技术支持;
5.转移第6列、第12列中含核酸的洗脱液,用于后续检测或-20°C储存。

步骤孔位名称混合时间(sec.)磁吸时间(sec.)等待时间(sec.)容积(μl)混合速度温度(℃)
11裂解3000090037
21结合6000070037
31吸磁30300700室温
42洗涤1120200700室温
53洗涤2120200700室温
64洗涤3120200700室温
75洗涤412030240700室温
86洗脱1206006050
94移去磁珠3000700室温 


1、手动提取时,洗脱前是否可以将样本放进烘箱挥发样本中乙醇?
答:不可以,洗涤液II洗涤后,尽量将残留液体去除后,让样品在室温下静置3-5min或更长时间以挥发乙醇,然后加入洗脱液。如乙醇残留太多会对后续检测有一定影响;但样品如果过于干燥,可能导致DNA不容易从磁珠上洗脱下来,减少提取量。

2、能否更换为ddH20进行洗脱?
答:洗脱液可以用TE缓冲液(pH7.5-8.5)或双蒸水。

3、液体样本使用量为多少?
答:液体样本使用量可为10-400µl,最佳为200-300µl。