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磁珠法质粒DNA提取试剂盒

分类:质粒提取目录:DE08

产品特性:

高通量
方便
自动化适用

适合于简单快捷提取质粒,快速从培养细菌中获得大量的质粒DNA,经过独特的表面修饰的磁珠,结合核酸能力更强、洗脱更容易,使用水即可将核酸从磁珠洗脱下来;提取的DNA可直接用于PCR、酶切、测序、转化等生物学实验。

操作流程(示意图):


医脉赛(EmerTher)磁珠法质粒DNA提取试剂盒在菌液样本抽提质粒的应用实例见下。

目录号规格适用机型
DE0800120份瓶装,适用于手工提取及Tecan、Hamilton等全自动移液工作站
DE08002100份瓶装,适用于手工提取及Tecan、Hamilton等全自动移液工作站
DE08003500份瓶装,适用于手工提取及Tecan、Hamilton等全自动移液工作站

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【手工提取步骤】
1. 取1-5ml过夜培养的菌液加入离心管中,5000g离心1min;
2. 弃上清,收集菌体沉淀;
3. 在离心管中加入100µl溶液I和10µl RNaseA溶液,充分混匀,悬浮菌体沉淀;
4. 加入150µl溶液II,温和上下颠倒混匀4-6次;
5. 向离心管中加入150µl溶液III,立即温和地上下颠倒混匀4-6次(出现大量白色絮状物),或用移液枪吸打混匀,直至溶液澄清,白色絮状物完全析出(如需完全降解RNA,建议静置10min);
6. 15,000g离心5分钟;
7. 将步骤6中所得的上清液转移到另一离心管,加入25µl核酸提取磁珠、200µl 结合液,上下颠倒温和混匀1-2min;
8. 用磁分离架吸附磁珠1min,弃上清;
9. 加入800µl 75%乙醇溶液洗涤磁珠两次;
10. 吸附磁珠,弃上清后静置5min,去除乙醇残留;
11. 加入100µl洗脱液,置于室温,混和均匀洗脱5min(56oC洗脱效果更佳);
12. 磁场吸附磁珠,回收含质粒DNA的洗脱液至另一干净离心管内,进行DNA检测及后续实验。

1、未提出质粒或质粒得率较低,如何解决?
A. 大肠杆菌老化:涂布平板培养后,重新挑选新菌落进行液体培养。
B. 质粒拷贝数低:由于使用低拷贝数载体引起的质粒DNA提取量低,可更换具有相同功能的高拷贝数载体。
C. 菌体中无质粒:有些质粒本身不能在某些菌种中稳定存在,经多次转接后有可能造成质粒丢失。例如,柯斯质粒在大肠杆菌中长期保存不稳定,因此不要频繁转接,每次接种时应接种单菌落。另外,检查筛选用抗生素使用浓度是否正确。
D. 碱裂解不充分:使用过多菌体培养液,会导致菌体裂解不充分,可减少菌体用量或增加溶液的用量。对低拷贝数质粒,提取时可加大菌体用量并加倍使用溶液,可以有助于增加质粒提取量和提高质粒质量。
E. 质粒未全部溶解 (尤其质粒较大时) :洗脱溶解质粒时,可适当加温或延长溶解时间。
F. 乙醇残留:洗涤液洗涤后应离心尽量去除残留液体,再加入洗脱缓冲液。

2、 怎样提取不同体积的菌液?
A.可以同比例调整试剂的用量达到提取不同体积的菌液的目的。
B.对于大体积菌液,建议使用强磁板,可以加速提取过程。