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磁珠法口腔拭子DNA提取试剂盒

分类:口腔拭子DNA提取目录:DE09

产品特性:

高通量
自动化操作
环境安全
DNA提取量高、纯度高

用于口腔拭子、唾液样本DNA提取,适合于DNA的磁珠自动化提取过程。

操作流程(示意图):


医脉赛(EmerTher)磁珠法口腔拭子DNA提取试剂盒在口腔拭子DNA提取的应用实例见下。

1)医脉赛(EmerTher)磁珠法口腔拭子DNA提取试剂盒在提取口腔拭子DNA的结果。



2)医脉赛(EmerTher)与国内竞品试剂盒提取效果对比。
样本:48名体检者提供的口腔拭子,每人2根拭子
样本前处理:将口腔拭子放入1.5mL离心管中,加入350μLATL缓冲液、20μL蛋白酶K溶液,涡旋混匀,置于56℃水浴消化30min完成样本前处理。
提取过程:加入消化好的全部约300μL液体样本至预装板,所有提取步骤都在96通道自动化仪器上完成,核酸洗脱体积100μL。

• 提取过程在96通道自动化仪器上完成,简单快速,节约人力,降低成本,减少错误。
• 通过对48个不同口腔拭子样本提取,从检测结果看,医脉赛磁珠法口腔拭子DNA提取试剂盒能够高效提取口腔拭子的DNA。
• 前处理后,整个提取过程约40min完成。
• 提取的DNA纯度及含量均较高,300μl样本中可以提取2.31±1.06μg DNA(提取浓度23.11 ±10.56ng/µl, 洗脱100 µl),OD260/280比值在1.97±0.06。
• 提取浓度和质量优于竞品,后期PCR结果也优于竞品(略)。

    目录号规格适用机型
    DE09B0120份
    DE09B02100份
    DE09A02100份
    DE09A1696份
    DE09B1696份
    DE09B9696份

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    【手工提取步骤】
    1. 将PK溶解液放入蛋白酶K粉末中,配制成浓度为20mg/ml的蛋白酶K溶液;
    2. 口腔拭子样本消化:将口腔拭子放入1.5ml离心管中,加入350µl ATL缓冲液、20µl蛋白酶K溶液,涡旋混匀,置于56°C水浴锅消化30min;
    3. 唾液样本:直接加300μl唾液样本至2ml离心管,另加20μl蛋白酶K溶液,涡旋混匀;
    4. 将步骤2或3所得液体样本全部放入2ml离心管中,加入600µl裂解吸附液,置于旋转混和仪,充分混匀10min;
    5. 加入30µl核酸提取磁珠,混匀10min,用磁分离架吸附磁珠1min, 弃上清液;
    6. 加入700µl洗涤液I洗涤磁珠,颠倒混匀洗涤1min,吸附磁珠,弃上清液;
    7. 再次加入700µl洗涤液I洗涤磁珠1min,吸附磁珠,弃上清液;
    8. 加入700µl洗涤液II洗涤磁珠1min,吸附磁珠,弃上清液;
    9. 再次加入700µl洗涤液II洗涤磁珠1min,将含磁珠的洗涤液移至另一干净离心管中;
    10. 吸附磁珠,弃上清液后静置3-5min,去除乙醇残留;
    11. 加入100µl洗脱液(如需高浓度DNA溶液,可相应减少洗脱量,但不应低于50µl),混和洗脱5min;
    12. 磁场吸附磁珠,回收含基因组DNA的洗脱液至另一离心管,进行DNA检测及后续实验。



    【自动化提取步骤(以32通道为例)】
    1. DE09B16预装板设置(96孔深孔板,样品量100-300µl, 16通量)


    2. 从试剂盒中取出预分装96深孔板,轻甩96深孔板使试剂及磁珠均集中到96深孔板底部。使用前小心撕去铝箔封口膜,避免96深孔板振动,防止液体溅出(注意:室温低于15°C时,请在开封使用前将96孔板置于37°C预热20min,以避免沉淀析出);
    3. 在第1列、 第7列溶液中加入消化好的全部约300µl液体样本;
    4. 放置2个8道磁套;选择附表所列的自动化提取程序,开始提取;客户可按所使用的核酸自动提取仪适当调整程序,如果有问题,请联系技术支持。
    5. 转移第6列、第12列中含核酸的洗脱液,用于后续检测或保存于-20°C冰箱。

    次序列号程序混合时间(sec.)磁吸时间(sec.)等待时间(sec.)体积(μl)混合速度温度(℃)
    11裂解6000090037
    22吸磁30300750室温
    31结合30030090037
    42洗涤1120200700室温
    53洗涤2120200700室温
    64洗涤3120200700室温
    75洗涤412030240700室温
    86洗脱30060010050
    94移去磁珠3000700室温




    1、口腔拭子DNA得率低,会有什么原因呢?
    A.消化样品没有充分混匀消化,蛋白酶K溶液与ATL缓冲液应与口腔拭子充分混和。
    B.口腔拭子放置时间过长,DNA降解。
    C.磁珠加样量不足,请在吸取磁珠前将核酸提取磁珠悬液充分混匀。
    D.与磁珠结合不充分,在DNA与磁珠结合过程中请温和摇匀,确保DNA与磁珠充分结合。
    E.样品没有按照要求保存,导致DNA降解。

    2、获得的DNA条带弥散,DNA片段断裂,会有什么原因呢?
    A.口腔脱落细胞存在正常核酸降解过程,少量DNA条带弥散是核酸降解过程的正常表现。
    B.样品放置时间过久,没有按照要求保存,请使用新鲜及正确保存的样品。