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磁珠法滤纸片干血斑DNA提取试剂盒

分类:滤纸片干血斑DNA提取目录:DE11

产品特性:

高通量
提取效果好
环境安全
自动化适用


医脉赛(EmerTher)磁珠法滤纸片干血斑DNA提取试剂盒在干血斑DNA提取的应用实例见下。

目录号规格适用机型
DE1100120份瓶装,适用于手工提取及Tecan、Hamilton等全自动移液工作站
DE11002100份瓶装,适用于手工提取及Tecan、Hamilton等全自动移液工作站
DE1196B96份医脉赛、圆点、奥盛、天隆、天根等品牌多种纯化机型
DE1160C60份Thermo Scientific KingFisher mL磁珠提取仪
DE1196D96份Thermo Scientific KingFisher Flex纯化系统

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【手工提取步骤】
1. 溶解蛋白酶K:按标签所示,吸取PK溶解液至蛋白酶K干粉中配制成蛋白酶K溶液20mg/ml,颠倒混匀数次让蛋白酶K充分溶解;
2. 用打孔器打下3个直径为3mm的干血斑滤纸,或用剪刀剪下3个3mm*3mm大小的干血斑滤纸,放入离心管中;
3. 加入400µl血斑裂解液,20μl蛋白酶K溶液,混匀后,置于56°C振荡消化0.5-1h,至滤纸褪色干净;
4. 吸取消化后溶液至离心管中,加入15µl提取磁珠,轻微摇动混匀;
5. 加入600µl核酸吸附液,置于旋转混和仪,混匀30min;
6. 用磁分离架吸附磁珠,弃上清液;
7. 加入700µl洗涤液I洗涤磁珠,颠倒混匀洗涤1min,吸附磁珠,弃上清液;
8. 再次加入700µl洗涤液I洗涤磁珠1min,吸附磁珠,弃上清液;
9. 加入700µl洗涤液II洗涤磁珠1min,吸附磁珠,弃上清液;
10. 再次加入700µl洗涤液II洗涤磁珠1min;
11. 吸附磁珠,弃上清液后静置3min,去除乙醇残留;
12. 加入30µl洗脱液,置于56°C水浴锅,洗脱5min;
13. 磁场吸附磁珠,回收含基因组DNA的洗脱液至另一离心管,进行DNA检测及后续实验。

【自动化提取步骤(以32通道为例)】
1. DE1196B预装板设置(96孔深孔板,样品量200µl,16通量)

2. 用打孔器打下3个直径为3mm的干血斑滤纸,或用剪刀剪下3片3mm*3mm大小的干血斑滤纸,放入离心管中;
3. 加入400µl血斑裂解液和20μl蛋白酶K溶液置于50°C恒温振荡仪,高速振荡混匀0.5-1hr;
4. 从试剂盒中取出预分装96深孔板,轻甩96深孔板使试剂及磁珠均集中到96深孔板底部。使用前小心撕去铝箔封口膜,避免96深孔板振动,防止液体溅出(注意:室温低于15°C时,请在开封使用前将96孔板置于37°C预热20min,以避免沉淀析出);
5. 吸取血斑裂解后的溶液200μl至第1列、第7列溶液中;
6. 放置2个8道磁套;选择附表所列的自动化提取程序,开始提取;客户可按所使用的核酸自动提取仪适当调整程序;
7. 转移第6列、第12列中含核酸的洗脱液,用于后续检测或-20℃储存。

次序列号程序混合时间(sec.)磁吸时间(sec.)等待时间(sec.)体积(μl)混合速度温度(℃)
11裂解60020080050
22移磁珠20200600室温
31结合60020080050
42洗涤1120200600室温
53洗涤260200600室温
64洗涤360300600室温
75洗涤46030120600室温
86洗脱3006005060
94移磁珠3000600室温 

1. 基因组DNA得率低,蛋白残留高,有什么原因呢?
A.干血斑未充分裂解,应确保干血斑滤纸完全浸没于裂解液中,并且在裂解时快速振荡样品,使干血斑滤纸与裂解液充分接触。
B.磁珠加样量不足,请将磁珠悬液充分混匀后再吸取磁珠。
C.与磁珠结合不充分。在DNA与磁珠结合过程中请温和摇匀,确保DNA与磁珠充分结合。
D.样品没有按照要求保存导致基因组DNA降解。

2.获得的DNA条带弥散,DNA片段断裂,有什么原因呢?
A. 样品没有按照要求保存,请使用新鲜及正确保存的样品。
B. 操作过程过于剧烈,DNA被机械打断,请严格按照说明书操作。

3.DNA样品不纯,抑制或者干扰后续试验,有什么原因呢?
A. 磁珠没有完全干燥,有乙醇残留,最后一次洗涤后尽量吸净离心管内的液体。
B. 加入洗脱液之前将磁珠室温静置3-5min,确保乙醇完全挥发,也要避免过度干燥导致DNA不容易从磁珠上洗脱下来,减少提取量。