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磁珠法全血DNA提取试剂盒

分类:全血DNA提取目录:DE17

产品特性:

高通量:快速完成血液基因组DNA提取过程
环境安全:不含苯酚,氯仿等有机试剂
抗凝剂普适:可用各种抗凝剂(EDTA等)
自动化适用

本试剂盒用于全血样本基因组DNA提取。试剂盒由高效吸附核酸的超顺磁性纳米微球和安全环保的提取试剂体系组成:经过独特的表面修饰的磁珠,结合核酸能力更强;洗脱容易,使用TE缓冲液或水即可将基因组DNA从磁珠上洗脱下来;操作简单、快速,适用于基因组DNA的磁珠自动化提取过程。使用本试剂盒纯化的基因组DNA可适用于各种下游操作,包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交、基因测序等实验。

操作流程(示意图):略。

略。

目录号规格适用机型
DE1700120份瓶装,适用于手工提取及Tecan、Hamilton等全自动移液工作站
DE17002100份瓶装,适用于手工提取及Tecan、Hamilton等全自动移液工作站
DE17003500份瓶装,适用于手工提取及Tecan、Hamilton等全自动移液工作站
DE1796A96份Thermo Scientific KingFisher自动纯化系统
DE1796B96份医脉赛、圆点、奥盛、天隆、天根等品牌多种纯化机型
DE1760C60份Thermo Scientific KingFisher mL磁珠提取仪
DE1796D96份Thermo Scientific KingFisher Flex纯化系统 


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【手动提取步骤】
1. 溶解蛋白酶K:按标签所示,吸取PK溶解液至蛋白酶K干粉中配制成蛋白酶K溶液40mg/ml,颠倒混匀数次让蛋白酶K充分溶解;
2. 取200-300µl全血样本放入2ml离心管中,加入20μl蛋白酶K、700µl裂解吸附液、30µl磁珠;
3. 置于旋转混和仪,充分混匀30min;
4. 用磁分离架吸附磁珠1min,弃上清液;
5. 加入800µl洗涤液I洗涤磁珠,将含磁珠的洗涤液转移至另一干净离心管中,颠倒混匀洗涤10min,吸附磁珠,弃上清液;
6. 加入800µl洗涤液II洗涤磁珠3min,吸附磁珠,弃上清液;
7. 加入800µl洗涤液III洗涤磁珠3min,吸附磁珠,弃上清液;
8. 再次加入800µl洗涤液III洗涤磁珠3min,吸附磁珠,弃上清液后静置2min,去除乙醇残留;
9. 加入100µl洗脱液,60℃混合洗脱10min;
10. 磁场吸附磁珠,回收含基因组DNA的洗脱液至另一离心管,用于后续检测或-20℃储存。

其它样本的预处理
A. 血细胞样本基因组DNA的提取
对分离血浆成分后的血细胞样本进行核酸提取时,请预先用蒸馏水1:1稀释样本:取100µl血细胞样本放入离心管中,加入100µl ddH2O,混合均匀。其余实验步骤同2-10。
B. 大样本全血基因组DNA的提取
取500µl-1000µl新鲜全血样本放入2ml离心管中,加入1ml红细胞裂解液(医脉赛目录号:CE01001或客户自备),颠倒数次裂解红细胞;置于离心机,350g离心10min;弃上清,加入200µl ddH2O,混合均匀。其余实验步骤同2-10。



【全自动提取步骤(以32通道为例)】
1. DE1796B预装板设置(96孔深孔板,样品量200µl,16通量)

2. 从试剂盒中取出预封装96深孔板,轻甩96深孔板使试剂及磁珠均集中到96深孔板底部。使用前小心撕去铝箔封口膜,避免96深孔板振动,防止液体溅出(注意:室温低于15℃ 时,请在使用前将96孔板置于37℃ 预热20min,以避免沉淀析出);
3. 在第1列、第7列中加入200µl样本和20μl蛋白酶K溶液;
4. 放置2个8道磁套;选择附表所列的自动化提取程序,开始提取;客户可按所使用的核酸自动提取仪适当调整程序,如果有问题,请联系技术支持;
5. 转移第6列、第12列中含核酸的洗脱液,用于后续检测或-20℃储存。

次序列号程序混合时间(sec.)磁吸时间(sec.)等待时间(sec.)体积(μl)混合速度温度(℃)
11裂解9000090050
22吸磁30300900室温
31结合60030090050
42洗涤1600200800室温
53洗涤2240200800室温
64洗涤3180200800室温
75洗涤41803060800室温
86洗脱42060015070
94移动磁场3000800室温


1.血液样本基因组DNA提取方法
磁珠法全血样本基因组DNA提取通常分为两类:
1) 一步裂解法:将全血样本直接加入裂解结合液后上机提取;
2) 两步裂解法:将全血样本与红细胞裂解液混合,待红细胞细胞膜破裂后,离心收集白细胞,加入裂解结合液后上机提取。
一步裂解法适应于各种血液,包括新鲜血液、冻存血液、去血浆血细胞等,通常血液处理量为10ul到300ul;
两步裂解法适用于白细胞结构完整的新鲜血液,通过离心后可对毫升级血液中白细胞进行富集后提取,可获得大量基因组DNA;因操作过程涉及裂解红细胞及离心收集白细胞,需注意保存样本中血细胞结构完整,过程较为繁琐。

2.在哪些情况下选择血液作为分子诊断DNA的来源
采用非侵入性的唾液及拭子采样可对遗传信息进行普通遗传分析,在下列情况下,推荐通过血液作为样本做为核酸来源:
1) 需去除外源核酸干扰的分析,如二代测序NGS等;
2) 细胞内寄生等感染性疾病检测;
3) 白细胞、造血细胞及血小板基因及变异分析;
4) 临床个性化及靶向用药分析;
5) 其他适应的条件。

3.提取当中血液颜色较深,液粘度较高,有什么方法可以尽量提取干净?
在洗涤的时候可以充分震荡混匀,更换新的离心管等操作,并且可以给予充足时间富集磁珠。