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链霉亲和素(Streptavidin)磁珠

分类:链霉亲合素(Streptavidin)目录:AE01

产品特性:

高品质微球:高磁响应、超顺性纳米微球
最大程度保持蛋白活性
高效偶联的纳米级微球拥有更高比表面积
高纯度低背景:非特异性吸附低
设备简单

医脉赛(EmerTher)链霉亲和素磁珠是由超顺磁性纳米颗粒与高纯度的链霉亲和素(Streptavidin)共价偶联而成,用于捕获生物素(Biotin)标记的底物包括DNA、RNA、PCR产物、寡核苷酸、多肽、抗原和抗体等。这种链霉亲和素-生物素(Streptavidin-Biotin)相互结合的强度高,加上EmerTher磁珠具有的快速磁响应性,高结合能力和低非特异性结合,因此可快速有效地从血清、细胞培养液等生物样品中分离纯化生物素标记的底物,应用于免疫纯化,免疫实验,核酸分离、细胞分离,细胞器分离等。整个提取过程可以手动完成,或与仪器联用达到自动化高通量应用。

操作演示(示意图):

医脉赛(EmerTher)链霉亲合素(Streptavidin)磁珠的应用实例见下:

纯化后的抗体-药物偶联物(Antibody-drug conjugation)ADC A 的 LC-MS/MS 定量分析谱图 (先将ADC A的抗体用生物素标记,再和医脉赛链霉亲和素磁珠通过链霉亲和素-生物素反应偶联,最后用偶联的磁珠从血浆中纯化出ADC A后定量; IS:内标物)

目录号规格适用机型
AE0100120mg/ml,1ml
AE0100220mg/ml,5ml

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【手工实验步骤】
本实验步骤提供一般操作流程,实验具体条件以及所需磁珠用量可根据特定应用由用户进行优化。
A. 生物素标记蛋白抗体的固定
1. 颠倒混匀磁珠,吸取所需要量的磁珠(如10µl,0.2mg)加入1.5ml灭菌离心管中;
2. 加1ml蛋白结合/洗涤缓冲液,洗涤磁珠,磁场吸附,弃上清液;
3. 将磁珠重悬于1ml蛋白结合/洗涤缓冲液,加入100-200µl含生物素标记蛋白的样品,轻柔振荡,在室温下孵育15-60分钟;
4. 磁场吸附,弃去上清液;
5. 加入蛋白结合/洗涤缓冲液(每次1ml)洗涤磁珠3-5次,每次5min,磁场吸附,弃去上清液;
6. 将磁珠重悬在合适的缓冲液中,用于下游实验。
B. 生物素标记核酸的固定
1. 颠倒混匀磁珠,吸取所需要量的磁珠(如10µl,0.2mg)加入1.5ml灭菌离心管中;
2. 加1ml核酸结合/洗涤缓冲液,洗涤磁珠,磁场吸附,弃上清液;
3. 将磁珠重悬于500µl核酸结合/洗涤缓冲液,加入100-200µl含生物素标记分子的核酸样品中,轻柔振荡,在室温下孵育10-15分钟;
4. 磁场吸附,弃去上清液;
5. 加入500µl核酸结合/洗涤缓冲液洗涤磁珠3-5次,每次2min,磁场吸附,弃去上清液;
6. 将磁珠重悬在合适的缓冲液中,用于下游实验。
【固定生物素标记的RNA,请在核酸结合/洗涤液中加入RNase Inhibitor.】
C. 分离生物素标记分子
链霉亲和素-生物素相互结合的强度很高,只有在特定条件下才能把生物素标记的分子从磁珠上洗脱下来:
1. 标记蛋白的解离:将固定有蛋白分子的磁珠重悬于SDS-PAGE reducing sample buffer,煮沸5分钟,再用磁场分离,以获得含蛋白分子的上清液,可用于SDS-PAGE凝胶电泳等检测。
2. 标记核酸的解离:将固定有DNA的磁珠重悬于10mM EDTA (pH 8.2),95% formamide,在65°C孵育5分钟或90°C孵育2分钟,以解离DNA。
3. 分离生物素与链霉亲和素的处理过程会使链霉亲和素蛋白变性,因此磁珠不能被重新使用。

1、链霉亲和素磁珠能用于免疫沉淀吗?
答:可以,链霉亲和素磁珠可直接和生物素标记的分子结合,再通过磁场分离,得到纯化的分子-磁珠复合物,用于下游的各种实验,包括核酸分析、分离纯化靶蛋白、SDS-PAGE凝胶电泳检测以及质谱分析等。链霉亲和素磁珠也可用于间接免疫沉淀。生物素标记的抗体先和样品反应,在溶液中形成抗原-抗体复合物,然后加入链霉亲和素磁珠捕获抗原-抗体复合物。这种方法适合于当抗原抗体浓度低,抗原抗体结合动力学缓慢、亲和力较弱,或抗原抗体结合需要特定的分子取向的情况。

2、样品中如果含有游离生物素,是否会减少链霉亲和素磁珠和生物素标记的分子的结合?
答:会的,但游离生物素可以通过超滤,透析或其他分离方法来除去。

3、链霉亲和素磁珠和生物素标记的分子结合的效率如何测定?
答:可以通过结合前后分子浓度的比较来确定。

4、如何减少非特异性结合?
答:可在结合/洗涤缓冲液中添加洗涤剂,如0.01-0.1%的Tween-20,以减少非特异性结合。

5、何种操作会在磁珠的使用和保存过程产生影响?
答:磁珠使用和保存过程中应避免冷冻、干燥和高速离心等操作,这些操作会降低磁珠结合能力。

6、链霉亲和素磁珠提取的底物可直接用于下游的液相-质谱(LC-MS/MS)分析吗?
答:可以。